[发明专利]一种有核细胞标识方法及其应用

权利要求书

1.一种有核细胞标识方法，其特征在于，该方法包括：

将含上述有核细胞的检材放入含有缓冲液的离心管中，振荡离心管，使检材上的细胞脱落，获得检材细胞的细胞悬液；

将龙胆紫或苏木素加入上述细胞悬液，进行染色；所述龙胆紫的终浓度为0.1～0.5μg/μl，染色时间为2～7分钟；所述苏木素的终浓度为1～7μg/μl，染色时间为3-7分钟；

对上述染色后的细胞悬液中的有核细胞利用显微镜进行观察和识别。

2.根据权利要求1所述的有核细胞标识方法，所述有核细胞的检材为含口腔粘膜上皮细胞与表皮细胞的混合细胞的检材，或含精子细胞和阴道上皮细胞的混合细胞的检材。

3.根据权利要求2所述的有核细胞标识方法，所述有核细胞的检材为含口腔粘膜上皮细胞与表皮细胞的混合细胞的检材，所述龙胆紫的终浓度为0.2～0.3μg/μl，染色时间为3～5分钟；所述苏木素的终浓度为3～6μg/μl，染色时间为3～5分钟。

4.根据权利要求2所述的有核细胞标识方法，所述有核细胞的检材为含精子细胞和阴道上皮细胞的混合细胞的检材，所述龙胆紫的终浓度0.15～0.35μg/μl，染色时间为4～7分钟；所述苏木素的终浓度为4.5～7μg/μl，染色时间为4～7分钟。

5.权利要求1-4任一项所述的有核细胞标识方法在使用显微操作仪捕获法联合LV-PCR的单细胞分离检测平台对混合检材中的有核细胞进行DNA分型的应用。

6.权利要求1-4任一项所述的有核细胞标识方法在激光显微切割法联合LV-PCR的单细胞分离检测平台中对混合检材中的有核细胞进行DNA分型的应用。

7.一种对混合检材中的有核细胞进行DNA分型的方法，该方法包括：

将获得的含有核细胞的检材放入含有缓冲液的离心管中，振荡离心管，使检材上的细胞脱落，获得检材细胞的细胞悬液；

将龙胆紫或苏木素加入上述细胞悬液，进行染色；所述龙胆紫的终浓度为0.1～0.5μg/μl，染色时间为2～7分钟；所述苏木素的终浓度为1～7μg/μl，染色时间为3～7分钟；

将灭菌后的载玻片置于显微镜载物台上，吸取上述染色后的细胞悬液滴加到载玻片上，使用显微操作仪捕获单个检材细胞；

把捕获的细胞置于低体积扩增反应玻片上，利用荧光标记复合扩增试剂盒进行LV-PCR扩增；

扩增结束后使用遗传分析仪对LV-PCR扩增产物进行检测获得分型结果。

8.一种对混合检材中的有核细胞进行DNA分型的方法，该方法包括：

将获得的含有核细胞的检材放入含有缓冲液的离心管中，振荡离心管，使其上的细胞脱落，获得检材细胞的细胞悬液；

将龙胆紫或苏木素加入上述细胞悬液，进行染色；所述龙胆紫的终浓度为0.1～0.5μg/μl，染色时间为2～7分钟；所述苏木素的终浓度为1～7μg/μl，染色时间为3～7分钟；

将上述染色后的细胞悬液进行离心，弃掉上清液后获得细胞沉淀，将细胞沉淀用30μl的缓冲液重悬后制作涂片；

使用激光显微切割法捕获上述涂片上的单个检材细胞；

把捕获的细胞置于低体积扩增反应玻片上，使用荧光标记复合扩增试剂盒进行LV-PCR扩增；

扩增结束后使用遗传分析仪对LV-PCR扩增产物进行检测获得分型结果。

9.根据权利要求7或8所述的对混合检材中的有核细胞进行DNA分型的方法，其特征在于，所述混合检材为含口腔粘膜上皮细胞与表皮细胞的混合细胞的检材，或含精子细胞和阴道上皮细胞的混合细胞的检材。

10.根据权利要求9所述的对混合检材中的有核细胞进行DNA分型的方法，其特征在于，所述混合检材为含口腔粘膜上皮细胞与表皮细胞的混合细胞的检材，所述龙胆紫的终浓度为0.2～0.3μg/μl，染色时间为3～5分钟；所述苏木素的终浓度为3～6μg/μl，染色时间为3～5分钟。

11.根据权利要求10所述的对混合检材中的有核细胞进行DNA分型的方法，所述混合检材为含精子细胞和阴道上皮细胞的混合细胞的检材，所述龙胆紫的终浓度为0.15～0.35μg/μl，染色时间为4～7分钟；所述苏木素的终浓度为4.5～7μg/μl，染色时间为4～7分钟。

12.根据权利要求10或11所述的对混合检材中的有核细胞进行DNA分型的方法，所述荧光标记复合扩增试剂盒为STR Identifiler或STR MiniFiler荧光标记复合扩增试剂盒。