[发明专利]一种定量分析蛋白质间相互作用的方法及其应用

权利要求书

1.一种定量分析蛋白质间相互作用的方法，是将Fluc和Rluc分别与要定量分析相互作用的目的蛋白X和预测蛋白Y融合表达，融合蛋白Fluc-X、Rluc-Y结合纯化后用DLR对相互作用蛋白的量进行精确定量，并对表达蛋白的总量进行精确定量，还可对相互作用蛋白之间的分子数量比例进行定量。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述定量分析相互作用的对象目的蛋白X与预测蛋白Y可以是任何蛋白、多肽或其它能与Fluc、Rluc藕联的化合物。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述将Fluc和Rluc分别与目的蛋白X和预测蛋白Y融合表达的方法为：先构建Fluc-X融合蛋白表达载体和Rluc-Y融合蛋白表达载体，再使融合蛋白共表达或分别表达再进行体外共同孵育。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述Fluc和Rluc与蛋白X和Y的融合方式可以通过N端和C端分别进行。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述融合蛋白Fluc-X表达载体为生物素化融合蛋白表达载体，是将Fluc基因插入真核表达载体pHAVI形成的报告基因表达载体，X蛋白基因与Fluc基因融合后得到。

6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述融合蛋白Rluc-Y表达载体是Rluc基因插入真核表达载体pCI-Flag形成的报告基因表达载体，Y蛋白基因与Rluc基因融合后得到。

7.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述生物素化融合蛋白Fluc-X表达载体和融合蛋白Rluc-Y的报告基因表达载体的表达可在细菌、体外细胞水平表达，或通过转基因的方式在动物体内细胞中表达，也可通过体外翻译系统进行合成表达。

8.根据权利要求1至7任一所述的方法，其特征在于：所述融合蛋白Fluc-X或Rluc-Y的纯化，可以通过在融合蛋白上添加标签分子，如生物素、6xHis、MBP或Flag等其它所有可用的标签分子，通过标签分子与其配基或抗体的特异性结合进行纯化；或者不添加标签，直接用Fluc、Rluc抗体或针对融合蛋白的抗体进行纯化。

9.权利要求1-8任一项所述方法在定量分析蛋白质间相互作用中或在确定蛋白质的功能、研究与疾病相关的分子致病机制、发现鉴定新的药物作用靶标中的应用。

10.一种定量分析蛋白质间相互作用的试剂盒，包括生物素化Fluc融合表达载体pHAVI、Rluc融合表达载体pCIRl-Flag和链亲和素磁珠。