[发明专利]一种重组人骨形态发生蛋白-2成熟肽的生产方法

权利要求书

1.一种重组人骨形态发生蛋白-2成熟肽的纯化生产方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将复性好的重组人骨形态发生蛋白-2成熟肽溶液上样于经平衡好的疏水层析柱，上样完毕后继续用平衡缓冲液冲洗到达基线，所述的平衡缓冲液包含10-30mM 2-环己胺基乙磺酸、0.2-1M尿素、2-10％N，N-二甲基甲酰胺、1-3M氯化钠或者硫酸铵，pH为7.0-9.0；

(2)用洗脱缓冲液进行盐浓度逐步降低的阶梯梯度洗脱，收集目标峰，所述的洗脱缓冲液包含10-30mM 2-环己胺基乙磺酸、0.2-1M尿素、2-10％N，N-二甲基甲酰胺，pH为7.0-9.0。

2.根据权利要求1所述的纯化生产方法，其特征在于，所述的疏水层析柱介质选自苯基琼脂糖凝胶，丁基琼脂糖凝胶，辛基琼脂糖凝胶，乙基聚合树脂，异丙基聚合树脂或苯基聚合树脂。

3.根据权利要求1所述的纯化生产方法，其特征在于，所述的平衡缓冲液和洗脱缓冲液中含有10-50mM三羟甲基氨甲烷-HCl。

4.根据权利要求1所述的纯化生产方法，其特征在于，所述的纯化方法是多步疏水作用层析，一步疏水层析得到的目标峰再经1-2次疏水层析，收集目标峰。

5.根据权利要求1所述的纯化生产方法，其特征在于，所述的纯化方法为疏水作用层析和离子交换层析联合使用。

6.根据权利要求5所述的纯化生产方法，其特征在于，所述的 离子交换层析为阴离子交换层析联用，层析介质为Q琼脂糖凝胶快速流(Q-sepharose Fast Flow)、Q琼脂糖凝胶高分辨率(Q-sepharoseHP)或者Q聚合树脂(SOURCE 15Q，SOURCE 30Q)。

7.根据权利要求6所述的纯化生产方法，其特征在于，所述方法除疏水层析步骤外，还包含以下步骤：

(1)将疏水层析得到的目标峰经平衡缓冲液稀释后，上样于经平衡好的阴离子交换层析柱，上样完毕后继续用平衡缓冲液冲洗到达基线，所述的平衡缓冲液包含10-50mM三羟甲基氨甲烷-HCl、10-30mM 2-环己胺基乙磺酸、0.2-1M尿素和2-10％N，N-二甲基甲酰胺，pH为8.0-9.0；

(2)用洗脱缓冲液进行盐浓度逐步增加的梯度进行洗脱，收集主峰，所述的洗脱缓冲液包含10-50mM三羟甲基氨甲烷-HCl、10-30mM2-环己胺基乙磺酸、0.2-1M尿素和2-10％N，N-二甲基甲酰胺、1-3MNaCl，pH为8.0-9.0。

8.根据权利要求5所述的纯化生产方法，其特征在于，所述的离子交换层析为阳离子交换层析联用，层析介质为羧甲基琼脂糖凝胶快速流(CM-Sepharose Fast Flow)。

9.根据权利要求8所述的纯化生产方法，其特征在于，所述方法除疏水层析步骤外，还包含以下步骤：

(1)将疏水层析得到的目标峰经平衡缓冲液稀释后，上样于经平衡好的阳离子交换层析柱，上样完毕后继续用平衡缓冲液冲洗到达基线，所述的平衡缓冲液包含10-50mM磷酸二氢钠-HCl、10-30mM 2- 环己胺基乙磺酸、0.2-1M尿素、2-10％N，N-二甲基甲酰胺，pH为6.0-6.5；

(2)用洗脱缓冲液进行盐浓度逐步增加的梯度进行洗脱，收集主峰，所述的洗脱缓冲液包含10-50mM磷酸二氢钠-HCl、10-30mM 2-环己胺基乙磺酸、0.2-1M尿素、2-10％N，N-二甲基甲酰胺、1-3M NaCl，pH为6.0-6.5。