[发明专利]用拉曼光谱在金纳米棒端面自组装介导下检测微囊藻毒素的方法

权利要求书

1.一种基于拉曼光谱在金纳米棒端面自组装介导下检测微囊藻毒素的方法，其特征在于步骤为：

(1)包被原的修饰：

将微囊藻毒素MC-LR的包被原与硫辛酸相偶联得到修饰的藻毒素包被原；

(2)抗体的修饰：

将抗微囊藻毒素MC-LR的抗体与硫辛酸相偶联得到修饰的抗微囊藻毒素MC-LR的抗体；

(3)用步骤(1)得到的修饰的藻毒素包被原与金纳米棒的端面偶联得到金纳米棒-包被原探针GNR-Ag；

(4)用步骤(2)得到的修饰的抗微囊藻毒素MC-LR的抗体与金纳米棒的端面偶联得到金纳米棒-抗体探针GNR-Ab；

(5)信号分子4-氨基苯硫酚和GNR-Ab金纳米捧的侧面偶联；

(6)微囊藻毒素MC-LR含量检测：利用间接竞争免疫检测原理，将微囊藻毒素MC-LR和步骤(3)得到的金纳米棒-包被原探针同时加入到一个离心管中，而后向离心管中加入步骤(4)得到的金纳米棒-抗体探针，混匀，通过微囊藻毒素MC-LR和金纳米棒-包被原探针与金纳米棒-抗体探针进行竞争偶联，通过微囊藻毒素MC-LR浓度的不同使形成的金纳米粒子形成不同的粒径分布，不同程度组装形成的纳米链对于拉曼信号的增强作用不同，通过拉曼仪器测定液体环境中的纳米链对于信号分子所产生的信号强度来间接测定微囊藻毒素的含量。

2.根据权利要求1所述的基于拉曼光谱在金纳米棒端面自组装介导下检测微囊藻毒素的方法，其特征在于包被原的修饰：

①含硫辛酸1.625mg的0.3mL的硫辛酸的乙醇溶液与含2mg的0.2mL的藻毒素包被原溶液混合；

②将75μL的碳二亚胺在磁力搅拌的条件下逐滴滴入上述溶液中后室温反应4h；

③用pH 7.4的磷酸盐缓冲液透析三天，每天换三次透析液；

④将修饰后的藻毒素包被原放在4℃备用。

3.根据权利要求1所述的基于拉曼光谱在金纳米棒端面自组装介导下检测微囊藻毒素的方法，其特征在于抗体的修饰：

①含硫辛酸1.625mg的0.3mL的硫辛酸的乙醇溶液与含4mg的0.4mL的藻毒素抗体混合；

②将75μL的碳二亚胺在磁力搅拌的条件下逐滴滴入上述溶液中后室温反应4h；

③用pH 7.4的磷酸盐缓冲液透析三天，每天换三次透析液；

④将修饰后的藻毒素抗体放在4℃备用。

4.根据权利要求1所述的基于拉曼光谱在金纳米棒端面自组装介导下检测微囊藻毒素的方法，其特征在于金纳米棒-抗体探针的制备：采用晶种生长法合成金纳米棒，合成的金纳米棒利用pH 3.8、含有0.1％聚乙二醇PEG的0.005M十六烷基三甲基溴化铵CTAB稀释溶液进行重悬，重悬液采用1M HCl调整pH值3.1，0.5mL浓度为2nmol重分散的金纳米棒逐滴滴加到由50μL经修饰后的藻毒素抗体中，最终分散到1mL的稀释溶液中，采用硫辛酸修饰的藻毒素抗体会修饰到金棒的端面而非侧面上，室温搅拌反应4h，反应结束后6000rpm离心10min，用1mL的pH 3.8、含有0.1％PEG的0.005M CTAB溶液进行重分散，洗涤两遍；最后用50μL的pH 3.8、含有0.1％PEG的0.005M CTAB溶液进行重分散；此金纳米棒-抗体探针，即金纳米棒-藻毒素抗体偶联物GNR-Ab置于4℃保存。

5.根据权利要求1所述的基于拉曼光谱在金纳米棒端面自组装介导下检测微囊藻毒素的方法，其特征在于金纳米棒-包被原探针的制备：藻毒素包被原和金纳米棒的偶联与权利要求4所述藻毒素抗体和金纳米棒的偶联相似，只是在包被原的量上有区别，即加入的藻毒素包被原60μL后用940μL的pH3.8、含有0.1％PEG的0.005M CTAB溶液进行稀释；此金纳米棒-包被原探针，即金纳米棒-藻毒素包被原偶联物GNR-Ag置于4℃保存。