[发明专利]免疫刺激RNA和HBV靶基因沉默RNA的双表达载体及其构建与应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种免疫刺激RNA和HBV靶基因沉默RNA的双表达载体，及其构建与应用，属于基因工程技术领域。

背景技术

HBV感染可引起急、慢性肝炎，并且与肝硬化、肝癌的发病密切相关。而且，作为一种能够逃逸免疫监视的病毒，在感染的早期不能引起免疫反应，从而不被机体抗病毒系统所清除。为HBV的治疗带来了挑战。RNAi技术用于抗HBV治疗，有望成为治疗乙型肝炎的革命性新方法。由于HBV复制具有以RNA为模板合成DNA的特点，只要阻断RNA的合成就能抑制DNA的复制，因此HBV感染特别适用于RNAi治疗。并且某些RNA序列能够激活免疫系统，诱导抗病毒反应。因此设计并构建能够表达靶向沉默HBV基因的RNA和能够激活免疫系统的RNA，是实现对HBV的治疗的有效手段。

发明内容

针对上述现有技术，针对HBV生命周期的特点，本发明提供了一种免疫刺激RNA和HBV靶基因沉默RNA的双表达载体，以及其构建方法，及在制备抗HBV的药物中的应用。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种免疫刺激RNA和HBV靶基因沉默RNA的双表达载体，是由转录shRNA的DNA序列、转录ssRNA的DNA序列与pTZU6+1载体组成的重组载体，其序列如seq.1所示。

本发明的免疫刺激RNA和HBV靶基因沉默RNA的双表达载体是通过以下方法构建制得的：

(1)针对HBV x基因的序列，人工设计合成shRNA相对应的DNA序列，并在序列的两端添加双酶切位点Sal I和Xbal I，退火形成双链结构，得表1所示的序列；

表1人工设计合成shRNA相对应的DNA序列

  Name  Type  Sequence 5′-＞3  shRNA1-f  DNA  tcgacgcata cttcaaagac tgtttgtcaa gagcaaacag tctttgaagt atgct  shRNA1-r  DNA  ctagagcata cttcaaagac tgtttgctct tgacaaacag tctttgaagt atgcg  shRNA2-f  DNA  tcgacggtta aaggtctttg tactagtcaa gagctagtac aaagaccttt aacct  shRNA2-r  DNA  ctagaggtta aaggtctttg tactagctct tgactagtac aaagaccttt aaccg  shRNA3-f  DNA  tcgacggcat aaattggtct gttcactcaa gaggtgaaca gaccaattta tgcct  shRNA3-r  DNA  ctagaggcat aaattggtct gttcacctct tgagtgaaca gaccaattta tgccg  shRNA4-f DNA  tcgacgtttt tcccctctgc ctaatcaaga gttaggcaga ggggaaaaa  shRNA4-r DNA  ctagattttt cccctctgcc taactcttga ttaggcagag gggaaaaacg