[发明专利]通过检测DNA浓度测定基质中食用菌菌丝生物量的方法

权利要求书

1.一种通过检测DNA浓度测定栽培基质中食用菌菌丝生物量的方法，包括下列步骤：

(1)培养标准菌丝

取待测食用菌斜面培养物，活化后打碎，接入新鲜的标准液体培养基中，摇床培养至菌丝稳定期；

(2)菌丝处理

过滤上述菌丝，无菌水冲洗，冷冻并充分干燥；

(3)构建标准曲线

将步骤(2)处理后的菌丝迅速研磨，梯度称取后置于容器中，用CTAB法提取DNA，NANODROP 1000紫外分光光度计确定DNA量，构建提取DNA量和提取用菌丝量的关联标准曲线；

(4)相应基质DNA水平确定

取相应基质，用CTAB法提取DNA，NANODROP 1000紫外分光光度计确定基质DNA本底水平；

(5)培养菌丝与基质混合，确定相应基质对DNA提取的影响

称取步骤(2)处理后的菌丝与上述基质混合，用CTAB法提取DNA，NANODROP 1000紫外分光光度计确定DNA量，与步骤(3)和(4)的结果比较，确定该种基质对DNA提取的影响；

(6)待测样品中食用菌菌丝生物量的确定

取待测样品，充分干燥，研磨，定量秤取后用CTAB法提取DNA，NANODROP 1000紫外分光光度计确定DNA量，对照标准曲线、基质本底和基质影响，确定含有基质的样品中食用菌菌丝的生物量。

2.根据权利要求1所述的一种通过检测DNA浓度测定栽培基质中食用菌菌丝生物量的方法，其特征在于：所述步骤(1)中的菌丝为香菇135菌丝。

3.根据权利要求1所述的一种通过检测DNA浓度测定栽培基质中食用菌菌丝生物量的方法，其特征在于：所述步骤(1)中的标准液体培养基为PDB培养基。

4.根据权利要求1所述的一种通过检测DNA浓度测定栽培基质中食用菌菌丝生物量的方法，其特征在于：所述步骤(2)中的处理后的菌丝含水量接近零，且DNA在冷冻的条件下不易降解。

5.根据权利要求1所述的一种通过检测DNA浓度测定栽培基质中食用菌菌丝生物量的方法，其特征在于：所述步骤(2)使用冷冻干燥机充分干燥。

6.根据权利要求1所述的一种通过检测DNA浓度测定栽培基质中食用菌菌丝生物量的方法，其特征在于：所述步骤(3)中用CTAB法提取DNA，每处理5个重复。

7.根据权利要求1所述的一种通过检测DNA浓度测定栽培基质中食用菌菌丝生物量的方法，其特征在于：所述步骤(4)中相应基质包括主料和辅料，其中主料为木屑、稻草、棉籽壳、甘蔗渣、玉米芯或麦秸，辅料为麸皮、米糠或豆饼。

8.根据权利要求1或7所述的一种通过检测DNA浓度测定栽培基质中食用菌菌丝生物量的方法，其特征在于：所述的相应基质取木屑先浸泡12-24h，再与麸皮混合，调整含水量至50％-60％，灭菌，然后冷冻至固态，再充分干燥。

9.根据权利要求1所述的一种通过检测DNA浓度测定栽培基质中食用菌菌丝生物量的方法，其特征在于：所述步骤(5)中的菌丝与相应基质的质量比为1∶4或3∶7。