[发明专利]猪圆环病毒Ⅱ型疫苗及其生产方法

说明书

技术领域

本发明属于生物制品技术领域，涉及一种猪圆环病毒Ⅱ型疫苗及其生产方法。

背景技术

猪圆环病毒Ⅱ型(简称PCV2)感染引起的断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)、猪呼吸疾病综合征(PRDC)、猪皮肤和肾病综合征(PDNS)等多种疾病(总称为猪圆环病毒病，PCVDs)，其临床特征为体重逐渐减轻，以及体征例如呼吸急促、呼吸困难和黄疸。从病理学观点来看，其表现为淋巴细胞或肉芽肿浸润，淋巴结病以及较罕见的肝炎和淋巴细胞或肉芽肿性肾炎。(Clark E.G.(1997)Proc.Am.Assoc.Swine Prac.499-501；La Semaine Veterinaire No.26，supplement to La Semaine Veterinaire 1996(834)；La Semaine Veterinaire 1997(857)：54；Nayar等人(1997)Can.Vet.J.38：385-387)。该病最早于1991年在加拿大西部发现(Clark EG.Post-weaning multisystemic wasting syndrome.Proc Am Assoc Swine Pract，1997，28：499-501)，随后，该疾病相继在美国、法国、西班牙、北爱尔兰等国或地区出现(Daft B等.Interstitial pneumonia and lymphadenophathy associated with circoviral infection in a six week-old pig.Proc Am Assoc Yet Lab Diag，1996，39：32；Kennedy S等.Porcine circovirus infection in Northern Ireland.vet Rec，1998，142：495并96；LeCann P等.Piglet wasting disease.Tlet Rec，1997，141：660；Segales J等.First report of post-weaning multisystemic wasting syndrome in pigs in Spain.Vet Rec，1997，141：600-660)。在国内，郎洪武等(郎洪武等.断奶猪多系统衰弱综合征血清抗体检测.中国兽医科技，2000，30：3-5)和曹胜波等(曹胜波等.猪Ⅱ型圆环病毒豫A株的全基因组克隆与序列分析.病毒学报，2000，18：137-141)分别通过血清学和病原学调查表明，我国已有PCV2的流行。目前，PCV2已在世界各地广泛存在并流行，给全球养猪业造成了相当大的经济损失。

目前还没有治疗和预防这种疾病的方法。然而，多项证据指出猪圆环病毒是PMWS(断奶仔猪多系统衰竭综合征)的病原体(Ellis等人(1998)Can.Vet.J.39：44-51)。圆环病毒已从患有PMWS的猪回收，并且针对猪圆环病毒的抗体已在患有该疾病的猪体内证实。由于该病毒是一种DNA病毒，病毒变异率低，同时在世界范围内的致病只有PCV2一型。而PCV2的生物学特性比较特殊，它在细胞上增殖滴度很低，而且不引起细胞病变，因此研制PCV2的灭活疫苗和弱毒疫苗的难度很大。

目前国内外生产疫苗主要有两种工艺：(1)生物反应器：规模较小，一般是实验室用，不能规模化生产；其有搅拌浆，以载体为依托培养细胞。这种方法的缺点是：搅拌产生剪切力，并且有气泡生成，影响细胞生长，规模化生产存在技术瓶颈。(2)转瓶技术：目前工业化生产基本都采用这种技术，生产细胞和病毒时劳动强度大、占地大、批间差异大、生产成本高、单批产量低，难以进行标准化生产的质量控制。

在我国还未有确实有效并经过农业部批准的PCV2疫苗，主要原因还在于，PCV2在细胞中的生长滴度较低，一般仅为10^4.0TCID₅₀/ml左右。因此提高病毒毒价，保证良好的临床效果是解决猪圆环病毒Ⅱ型疫苗产业化的当务之急。

发明内容

本发明主要目的是提供一种猪圆环病毒Ⅱ型疫苗的生产方法，包括如下步骤：

1)微载体生物反应器中，微载体密度为60～80g/L，每克载体加入1.4×10⁷～2.6×10⁷个传代细胞及细胞生长液，启动细胞吸附程序使微载体与传代细胞充分结合后，启动细胞培养程序，培养传代细胞；