[发明专利]猪圆环病毒Ⅱ型疫苗及其生产方法

权利要求书

1.一种猪圆环病毒Ⅱ型疫苗的生产方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)微载体生物反应器中，微载体密度为60～80g/L，每克载体加入1.4×10⁷～2.6×10⁷个传代细胞及细胞生长液，启动细胞吸附程序使微载体与传代细胞充分结合后，启动细胞培养程序，培养传代细胞；

2)上述传代细胞培养至5.0×10⁹cells/L～8.0×10¹⁰cells/L时换用细胞维持液，按照感染复数为M.O.I.＝0.001～1接种猪圆环病毒Ⅱ型，启动病毒吸附程序，使病毒与传代细胞充分接触，换用病毒培养程序，扩增培养猪圆环病毒Ⅱ型；

3)病毒培养24～36h后，弃去细胞维持液，用缓冲溶液冲洗传代细胞，加入孵育剂孵育30～45min，弃去孵育剂，用缓冲溶液冲洗传代细胞，加入细胞维持液继续培养；

4)收获培养液，经细胞破碎处理，获得猪圆环病毒Ⅱ型病毒液；

5)病毒液加入灭活剂，灭活后加入佐剂、乳化剂，制得猪圆环病毒Ⅱ型疫苗。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述生物反应器为微载体悬浮培养生物反应器。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述生物反应器为为潮汐式微载体悬浮培养生物反应器。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述微载体为球形、网状或片状微载体。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述微载体为聚酯、明胶或多糖。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2)中所述细胞生长液为含3％～10％牛血清的DMEM培养基。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述牛血清的含量为5％～7％。

8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述牛血清的含量为6％。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3)中所述细胞维持液为含1％～5％牛血清的DMEM培养基。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述的牛血清的含量为2％～3％。

11.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述的牛血清的含量为2％。

12.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3)中所述的孵育剂为D-氨基葡萄糖、干扰素或脂多糖。

13.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述微载体悬浮培养生物反应器的培养条件为温度37℃，CO₂浓度为5％，培养液pH值为7.0～7.6。

14.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤4)中所述猪圆环病毒Ⅱ型病毒液的体积为2.5L～1000L。

15.一种由权利要求1-14任意一项方法制备的猪圆环病毒Ⅱ型病毒液。

16.一种由权利要求1-14任意一项方法制备的猪圆环病毒Ⅱ型疫苗。