[发明专利]利用小孢子培养和无性克隆技术选育甘蓝型油菜隐性核不育系的方法

权利要求书

1.一种利用小孢子培养和无性克隆技术选育甘蓝型油菜隐性核不育系的方法，其特征在于，包括以下步骤：

a、以F₁代植株为供体，在花蕾期，每次从油菜花序上取3～4mm大小的蕾，表面消毒后用无菌水清洗3次；加入B₅培养液研磨，用40μm尼龙网过滤，滤液经过100g离心5-8min，吸去上清液后，再向离心管中加含秋水仙碱的NLN-16培养液密封，置于32℃的恒温箱中暗培养48h，然后重复上述步骤离心，吸去上清液，加入NLN-13培养液分装到培养皿中，密封，置于25℃的恒温箱中暗培养，当肉眼可见到胚状体后转到摇床上继续培养1-2周；

b、将上述a步中的胚状体转移到固体B₅培养基上，在10℃的光照培养室中诱导形成小植株，然后置于25℃的光照培养室中培养，并将每个不同基因型的小植株扩繁多个拷贝；

c、将上述b步中的小植株分不同基因型种植到田间，到花期，将加倍成功，且表现为不育的DH株系与隐性核不育临保系测交；

d、将上述c步中测交种进行鉴定，若测交种为全部不育，则对应的单株即为隐性核不育系。

2.根据权利要求1所述的利用小孢子培养和无性克隆技术选育甘蓝型油菜隐性核不育系的方法，其特征在于，所述F₁代是以优良的品种/系与隐性核不育系或临保系杂交而成。

3.根据权利要求2所述的利用小孢子培养和无性克隆技术选育甘蓝型油菜隐性核不育系的方法，其特征在于，所述优良的品种/系为沪油15。

4.根据权利要求2所述的利用小孢子培养和无性克隆技术选育甘蓝型油菜隐性核不育系的方法，其特征在于，所述隐性核不育临保系为临保系M-6029，基因型为aabbrfrf，可育。

5.根据权利要求2所述的利用小孢子培养和无性克隆技术选育甘蓝型油菜隐性核不育系的方法，其特征在于，利用隐性核不育临保系M-6029对表现为不育的DH株系进行基因型鉴定。

6.根据权利要求1所述的利用小孢子培养和无性克隆技术选育甘蓝型油菜隐性核不育系的方法，其特征在于，通过无性克隆技术对所获得的隐性核不育系进行永久保存，并扩繁得到生产上需要的大量不育株，用于生产全不育系，进而生产商用杂交种。