[发明专利]中砧1号组织培养的方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物组织培养领域，特别涉及中砧1号组织培养的方法。

背景技术

苹果是世界上列柑橘、香蕉、葡萄之后的第四大水果，也是我国栽培面积最大、产量最多的水果。我国苹果生产具有悠久的栽培历史，有较丰富的管理经验，已形成了种苗繁育、生产栽培、采后加工储藏和深加工的产业链。但从总体来讲，目前我国的苹果生产和发达国家相比，树种品种结构不合理，大多数还存在经营粗放、栽培管理水平不高、果品质量较差、效益不高的现象。要转变这种广种薄收、高投入低产出的现状，加强对现有低产园的改造，提高单产和果品品质，矮化密植是主要的发展趋势，选用矮化砧木是实现矮化密植栽培的前提与途径(朱树华，郁松林，权俊萍，石河子大学学报(自然科学版)，2003(4))。

我国育成的苹果矮化砧木，在正常条件下扦插压条都不易发根，无性繁殖困难，只能采用中间砧方式利用。而实生砧苗压条繁殖虽容易生根，可进行营养繁殖，扩大繁殖系数，但是基础材料不足限制推广速度。

小金海棠(Malus xiaojinensis Cheng et Jiang)是苹果属的四倍体(2n＝4x＝68)野生种质资源，作苹果砧木利用，其综合性状优良，是很有希望的苹果半矮化砧木(成明昊，杨晓红，曾继光，1984，西南农学院学报，3：38～43)。中砧1号是中国农业大学历时25年从中选出的耐缺铁优良种质，具有耐盐碱、耐热、耐旱、耐涝、抗寒(-45℃)、抗白粉病、固地性好等特性，对潜隐病毒也有较强的抗性，嫁接红富士、红星、金冠、国光、北斗、王林等苹果品种也表现嫁接亲和性好。去雄套袋后花朵坐果率为86.7％，具有无融合生殖特性，实生苗整齐一致，也可用实生苗压条扩大繁殖系数。但中砧1号果实出种率很低，平均每果饱满种子数仅0.9粒，约需200斤果实出一斤种子，所以实生繁殖远远不能满足生产要求。

组织培养作为生物工程的一项重要技术，近年来已在生物科学领域获得了长足发展，尤其是园艺植物的应用上取得了丰硕成果。据不完全统计，目前通过组织培养繁殖的果树包括多个科的多个种，外植体类型从茎尖、叶片、花药、胚乳、叶肉原生质体等均再生出植株，其中以茎尖培养的研究较多、进展快，在一些果树种类上已进入实用阶段(张庆田，山东农业大学，2007)。

木本植物组培苗生根普遍困难，关于这一问题的解释已趋向一致：除了基因型的差别外，年龄时期起了主要作用。在排除了基因型和年龄时期对生根的影响外，外源生长素对组培苗生根的诱导作用得到了广泛的认可；而且在生长素完成了诱导作用后，它们在培养基中的存在对新根的发生有抑制作用。

中砧1号属于木本植物，其在组织培养是发生褐变的问题很严重，随着苗龄增大褐变程度也有所增加，从而给这一类植物的组织培养快速繁殖带来了很大的困难。

目前尚未有对中砧1号建立高效组培快繁技术体系。

发明内容

本发明目的在于提供一种生产中砧1号再生苗的方法。

本发明提供生产中砧1号再生苗的方法是将中砧1号种子经无菌预培养，得到无菌苗，然后将所述无菌苗的茎尖进行初代培养，得到再生苗。

上述无菌预培养是所述中砧1号种子接种到预培养的培养基中培养；所述预培养的培养基是在水中添加碳源和凝胶剂得到的固体培养基；

所述凝胶剂是琼脂或卡拉胶，优选是琼脂，所述琼脂在所述预培养的培养基中的终浓度优选是7g/L；所述碳源是蔗糖或麦芽糖，优选是蔗糖，所述蔗糖在所述预培养的培养基中的终浓度优选是30g/L。

上述初代培养是将所述无菌苗的茎尖接种到初代培养基上培养，所述初代培养基是在MS基本培养液中添加6-BA、NAA、碳源和凝胶剂得到的固体培养基；其中所述6-BA的终浓度为0.5-2.0mg/L，NAA的终浓度为0.01-0.10mg/L；所述6-BA的终浓度优选为1.0mg/L；NAA的终浓度为0.05mg/L；所述MS基本培养液的溶剂是水、溶质如表1所示。

表1.MS基本培养液的溶质(mg/L)

上述初代培养基中的凝胶剂是琼脂、卡拉胶或Gelrite，优选是琼脂；所述凝胶剂在所述初代培养基中的终浓度是7g/L；

上述初代培养基中的碳源是葡萄糖、麦芽糖或蔗糖，优选为蔗糖；所述碳源在所述初代培养基中的终浓度是30g/L。

本发明的另一目的在于提供一种生产中砧1号再生植株的方法。

本发明提供的生产中砧1号再生植株的方法包括以下步骤：

1)根据任一上述的方法制备得到再生苗；

2)将步骤1)中得到再生苗进行生根培养，得到完整的再生植株。