[发明专利]中砧1号组织培养的方法

权利要求书

1.一种生产中砧1号再生苗的方法，是将中砧1号种子经无菌预培养，得到无菌苗，然后将所述无菌苗的茎尖进行初代培养，得到再生苗。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述无菌预培养是所述中砧1号种子接种到预培养的培养基中培养；所述预培养的培养基是在水中添加碳源和凝胶剂得到的固体培养基；

所述凝胶剂是琼脂或卡拉胶，优选是琼脂，所述琼脂在所述预培养的培养基中的终浓度优选是7g/L；所述碳源是蔗糖或麦芽糖，优选是蔗糖，所述蔗糖在所述预培养的培养基中的终浓度优选是30g/L。

3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述初代培养是将所述无菌苗的茎尖接种到初代培养基上培养，所述初代培养基是在MS基本培养液中添加6-BA、NAA、碳源和凝胶剂得到的固体培养基；其中所述6-BA的终浓度为0.5-2.0mg/L，NAA的终浓度为0.01-0.10mg/L；所述6-BA的终浓度优选为1.0mg/L；NAA的终浓度为0.05mg/L；所述MS基本培养液的溶剂是水、溶质如表1所示。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于：所述初代培养基中的凝胶剂是琼脂、卡拉胶或Gelrite，优选是琼脂；所述凝胶剂在所述初代培养基中的终浓度是7g/L；

所述初代培养基中的碳源是葡萄糖、麦芽糖或蔗糖，优选为蔗糖；所述碳源在所述初代培养基中的终浓度是30g/L。

5.一种生产中砧1号再生植株的方法，包括以下步骤：

1)根据权利要求1-4中任一所述的方法制备得到再生苗；

2)将步骤1)中得到再生苗进行生根培养，得到完整的再生植株。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于：步骤2)中，所述生根培养包括以下步骤：将所述再生苗在生根培养基中培养；所述生根培养基是在1/2MS基本培养液中添加如下物质得到的固体培养基：IBA、碳源和凝胶剂；所述生根培养基中IBA的终浓度是0.01-2.00mg/L，优选是0.50mg/L；所述1/2MS基本培养液的溶剂是水、溶质是将表1所示的溶质中的大量元素减半，微量元素、有机物和铁盐浓度不变得到的溶质。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于：所述生根培养基中的凝胶剂是琼脂、卡拉胶或Gelrite，优选是琼脂；所述凝胶剂在所述生根培养基中的终浓度是7g/L；

所述生根培养基中的碳源是葡萄糖、麦芽糖或蔗糖，优选为蔗糖；所述碳源在所述生根培养基中的终浓度是30g/L。

8.如权利要求6或7所述的方法，其特征在于：所述生根培养的步骤中，所述再生苗在进入生根培养基之前还经过预生根的步骤；所述预生根是将所述再生苗置于预生根培养基中进行；所述预生根培养基是在MS基本培养液中添加6-BA、NAA、碳源和凝胶剂得到的固体培养基；所述预生根培养基，所述6-BA的终浓度为0.25mg/L，NAA的终浓度为0.05mg/L；所述MS基本培养液的溶剂是水、溶质如表1所示。

9.根据权利要求5-8中任一所述的方法，其特征在于：所述方法还包括步骤1)和步骤2)之间的继代培养，所述继代培养是将步骤1)得到的再生苗转接到扩繁培养基中培养，得到增殖的再生苗；

所述扩繁培养基是在MS基本培养液中添加6-BA、NAA、碳源和凝胶剂得到的固体培养基；其中6-BA的终浓度为0.05-1.00mg/L，NAA的终浓度为0.05-1.00mg/l；所述6-BA的终浓度优选是0.5mg/L，NAA的终浓度优选是0.5mg/L；所述MS基本培养液的溶剂是水、溶质如表1所示。

10.如权利要求8或9所述的方法，其特征在于：所述预生根培养基和扩繁培养基中，所述凝胶剂均是琼脂、卡拉胶或Gelrite，均优选是琼脂；所述凝胶剂在预生根培养基和扩繁培养基中的终浓度均是7g/L；

所述预生根培养基和扩繁培养基的碳源均是葡萄糖、麦芽糖或蔗糖，均优选为蔗糖；所述碳源在所述预生根培养基和扩繁培养基中的终浓度均是30g/L。