[发明专利]伊立替康纳米长循环脂质体及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及一种制备伊立替康长循环纳米脂质体的新方法。

背景技术

伊立替康(羟基喜树碱-11，CPT-11)系我国天然特有的珙桐科植物喜树中提取分离的左旋微量生物碱，为半合成的可溶性喜树碱衍生物，是DNA拓扑异构酶I（Topo-1）抑制剂^[1]，伊立替康与其代谢物SN-38通过与DNA-Topo-1复合体的稳定结合引起DNA单链的断裂，使DNA产生不可逆的损伤而死亡。研究表明，多种肿瘤细胞，特别是结直肠癌、宫颈癌、卵巢癌等细胞内的Topo-1含量大大高于正常组织，由于伊立替康独特的作用机制，对上述肿瘤细胞有着较高的选择性，从而发挥其特异性抗肿瘤的活性，并降低其对正常细胞的毒性。作为一种新型的抗肿瘤药物，自从上世纪90年代被发现以来，在世界范围内已引起了临床的广泛关注，被誉为90年代抗癌药物的三大发现之一^[2]。      

目前国内上市的伊立替康产品仅为其盐酸盐的注射剂，该药在剂量较大时可引起严重的腹泻和骨髓抑制^[3]，这两种不良反应被认为是与剂型相关的毒性。因此该药在临床上更广泛地使用存在一定的局限性。

脂质体是一种微粒分散体系，粒径在100-1000nm之间，物理、化学稳定性都较差。由于肿瘤的血管间隙可以达到100-780nm，正常血管内皮细胞之间的间隙通常在2nm左右。静脉注射给药后，大粒径的脂质体很容易被体内的单核巨噬系统所吞噬，从而被迅速清除。小粒径的脂质体在血液循环过程无法进入正常组织，但可有效的穿透肿瘤区的血管，因此纳米脂质体(<200nm)可以被动的聚集在肿瘤区，更好的发挥治疗作用，是人们设计的较理想的脂质体药物载体。纳米颗粒作为药物载体的研究已有20年历史，它是一种应用领域广泛、性能突出的新型药物载体，是国际药剂学界研究的热点领域之一。大量的研究表明它在靶向给药领域有巨大的潜在应用价值。由于纳米颗粒具有可改变药物体内分布、药物释放速度、生物利用度、药物对生物膜的透过性及药物在局部的滞留性等优点^[4]，使其可以载带多种药物，用于器官靶向、胞内靶向、骨髓靶向等药物传递系统中，或用于注射剂、口服制剂、眼用制剂、透皮制剂中。

Messerer^[5]等以二硬脂酰磷脂酰胆碱和胆固醇为膜材，采用MnSO₄梯度装载法制备了伊立替康脂质体。发现脂质体可以有效保护药物的活性内酯结构，使伊立替康活性内酯形式在血浆中的清除明显降低。   

PharmaEngine公司对伊立替康的剂型进行改良，开发出了新的脂质体剂型，通过脂质体膜对药物的包封和缓释作用，不仅可以增加药物在受试者体内的靶向性和延长作用时问。更降低了药物毒性，增加了用药安全性。美国FDA 于2008年l2月 3日同意PharmaEngine公司在代谢性胰腺癌受试者体内进行伊立替康脂质体注射液的II期临床试验。美国肿瘤学会2008年度会议的报告表明，在台湾进行的I期临床试验中。该药对晚期顽固性肿瘤受试者呈现出良好的药代动力学、有效性和耐受性。

但是，目前脂质体应用程度受限的主要因素之一就是稳定性问题。虽然脂质体制备方法有多种，但尚未制备出在体内外均稳定的脂质体。脂质体进入体内后，由于血中的白蛋白、调理素、抗体等各种因素作用，脂质体发生破裂，包封药物快速渗漏，很快被网状内皮系统识别、吸收，限制了它的“导弹”功能。为此，人们从各种途径想办法解决脂质体的体内外稳定性，制备稳定的长循环在脂质体。通过高分子物质来改变脂质体表面亲水性亚结构，形成表面有高分子材料包裹的脂质体，，尤其是用聚乙二醇(PEG)修饰的长循环脂质体(long—circulationliposomes，LCL)，表面暴露的亲水性基团所产生的空间位阻可以增加脂质体在血液中的稳定性，不但提高了对靶向组织的选择性，而且能够逃避网状内皮系统的捕获，以获得更充足的时间到达靶向部位，被称为“隐形脂质体”(stealth liposomes, S-liposomes)，又称立体稳定脂质体或空间稳定脂质体(sterically stabilized liposomes)。由于聚乙二醇价廉易得、可以大规模生产、分子量易于控制、物理化学性质良好，可以事先将其制备成聚乙二醇－磷脂衍生物，同时制剂工艺相对简单，已成为目前高分子修饰脂质体的研究重点。