[发明专利]油乳剂疫苗及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于兽用生物制品技术领域，具体涉及禽用油乳剂疫苗及其制备方法。

背景技术

我国禽肉产品屡遭封关，1996年8月1日至2001年5月24日，欧盟以我国出口的禽肉中含有动物疫病和农药、兽药残留等为由对我国封关5年。2004年欧盟又以禽流感为由全面禁止进口我国禽肉产品，直到2008年8月才宣布解除我国禽肉产品禁令。刚解除禁令又遇“配额”难题。解决所有问题的先决条件就是要提高我国禽产品质量。为减少禽病害发生，同时为避免长期应用抗生素、激素类产品所造成的菌群失调，耐药菌株增加及药物残留等负面影响，以发展优质，无公害的禽产品，保证我国家禽产业持续健康发展并参与国际市场的竞争，具有良好免疫效果的疫苗将起极其重要的作用。

目前，预防和控制家禽传染病除生物安全措施外，主要依靠疫苗免疫，特别是通过油乳剂疫苗的免疫。油性佐剂疫苗是已公认的可有效强化免疫性的疫苗。油乳剂疫苗的生物安全性高，具有用最小量的抗原，最少的接种次数，延长免疫刺激时间，使机体产生足够量的抗体的特点，所以乳化品质优良的油乳剂苗是保证免疫效果的前提。在现有的油乳剂疫苗(简称“油苗”)生产过程中，通常添加2％的硬脂酸铝来增加其稳定性，但其粘度较大引起免疫注射的应激反应较大，如导致严重接种反应、形成无菌性化脓损害和接种部位周围形成肉芽肿等，可产生外部可见的浮肿、肿胀、硬结和坏死。而且人们怀疑在接种部位有残留的可能，这便妨碍了疫苗的使用，这种现象在肉鸡免疫中表现得尤为明显。基于这个原因，使用含有矿物油的油性佐剂的疫苗有时是受到一定限制的。

对于油性佐剂疫苗而言，已知这种疫苗不仅在免疫强化作用方面，而且在疫苗的稳定性方面，都在相当大的程度上受到乳剂类型、所用油性成分以及所结合的表面活性剂种类等因素的影响。尤其就灭活疫苗来说，制备出一种具有在较长时间内能诱导产生充分免疫保护作用，并有着良好再现性的疫苗，是非常困难的。

发明内容

有鉴于此，本发明的主要目的在于提供一种油乳剂疫苗，由体积百分比33.3％的水相与体积百分比66.7％的油相构成，其中水相由能够诱导宿主免疫应答的疫苗抗原、亲水性非离子型表面活性剂和水构成，油相由矿物油、卵磷脂、丙二醇、异甘露醇单油酸脂和亲油性非离子型表面活性剂构成。

优选地，本发明所述的疫苗抗原为灭活的禽类病毒性微生物，包括新城疫病毒、禽流感病毒、支气管炎病毒、减蛋综合症病毒、法氏囊病毒或上述灭活病毒的任意一种病毒或任意几种病毒的混合物。

优选地，本发明所述的亲水性非离子型表面活性剂为吐温-80。

优选地，本发明所述的亲油性非离子型表面活性剂为司盘-80。

优选地，本发明所述的矿物油为白油佐剂。

优选地，本发明所述的异甘露醇单油酸脂通过以下方式制备：油酸甲酯、异甘露醇与甲醇钠在25～50mmHg真空度下加热至100℃，保持1h，冷至室温，加入己烷，过滤除去异甘露醇，在218℃～220℃及0.175mmHg大气压力下蒸馏得到异甘露醇单油酸脂。

优选地，本发明所述的油乳剂疫苗，由以下体积百分比组分构成：水相为29.33％～32％疫苗抗原、0.44％～1.33％亲水性非离子型表面活性剂、0.89％～2.67％水；油相为0.67％～3.33％的卵磷脂、0.67％～3.33％的丙二醇、0.67％～3.33％的异甘露醇单油酸脂、1.33％～10％的亲油性非离子型表面活性剂、46.68％～63.33％矿物油。

本发明的另一目的在于提供一种油乳剂疫苗的制备方法，包括以下步骤：

1)水相的制备：将亲水性非离子型表面活性剂用水以3倍体积稀释，然后121℃高压灭菌30min后冷却至室温，混合均匀备用，再加入疫苗抗原使亲水性非离子型表面活性剂最终占总体积的2.67％～8％，疫苗抗原最终占总体积的88％～96％；

2)油相的制备：将矿物油、丙二醇、卵磷脂和异甘露醇单油酸脂混合均匀为佐剂，再与亲油性非离子型表面活性剂混匀做为油相，经121℃高压灭菌30min后冷却至室温，使亲油性非离子型表面活性剂最终占总体积的2％～15％、丙二醇最终占总体积的1％～5％、卵磷脂最终占总体积的1％～5％、异甘露醇单油酸脂最终占总体积的1％～5％；

3)乳化：按油相∶水相＝2∶1的体积比，先将油相倒入乳化罐，搅拌转速为9,000～13,000rpm，温度10～20℃的情况下，将水相以0.6ml/s的速度加入油相中，再继续以速度13,500～17,500rpm乳化3～7min，获得油乳剂疫苗。

技术效果