[发明专利]阪崎肠杆菌检测方法及其金标快速诊断试剂盒和制备方法

权利要求书

1.一种阪崎肠杆菌检测方法，其特征在于：(1)将胶体金标记的阪崎肠杆菌抗体载于玻璃纤维或无纺布载体上，并在与胶体金标记抗体载体相连的检测载体上包被抗阪崎肠杆菌抗体(多抗或单抗)形成的检测线和由羊或兔抗鼠IgG抗体形成的控制线；(2)取检测样本稀释液滴于胶体金标记抗体的载体上，如上述稀释液含有阪崎肠杆菌，则在检测载体上形成检测线和控制线双线，显双线结果判定为阳性，仅控制线显色结果判定为阴性。

2.一种阪崎肠杆菌金标快速诊断试剂盒，其特征在于该试剂盒内设阪崎肠杆菌金标检测卡，检测卡由检测条和塑料卡盒组成，检测条安装在塑料卡盒内。

3.如权利要求2所述的阪崎肠杆菌金标快速诊断试剂卡，其特征在于所述的阪崎肠杆菌金标检测卡(1)是在衬板(10)上设有加样端吸水层(4)、检测层(8)和吸水端吸水层(9)，在检测层(8)和加样端吸水层(4)之间设有金标阪崎肠杆菌抗体层(5)，在检测层(8)上包被有检测线(7)和控制线(6)。

4.如权利要求2所述的阪崎肠杆菌金标快速诊断试剂盒的制备方法，其特征在于制备金标抗体层(5)和检测层(8)的控制线(6)、检测线(7)的包被，然后在衬板(10)上组合阪崎肠杆菌金标测试条和检测卡(1)。

5.如权利要求4所述的阪崎肠杆菌金标快速诊断试剂盒的制备方法，其特征在于所述的金标抗体层(5)的制备方法包括下述步骤：i胶体金的制备，在浓度为0.004～0.012％的氯金酸中加入其体积的1.3～2％，浓度为1～3％的柠檬酸三钠，煮沸10～20分钟，可得到15～50纳米的胶体金溶液；ii胶体金标记抗阪崎杆菌单克隆抗体，在胶体金溶液中用0.2m碳酸钾溶液调pH8.0～8.4，按4～12mg/100ml加入抗人阪崎杆菌单克隆抗体，搅拌后，再在溶液中按0.1～0.6g/100ml加入动物血清蛋白，4℃静置2-4小时；iii将上述胶体金溶液经2000转/分钟离心10～15分钟，弃沉淀物，得上清液；iv将上清液经10000转/分钟离心60～80分钟离心得沉淀物；v将沉淀物按4-10ml/100ml溶于0.02M、pH7.4Tris-HCI缓冲液得胶体金溶液，该缓冲液中含0.2-0.6％的动物血清蛋白和0.01-0.06％叠氮钠；vi将上述胶体金溶液浸入玻璃纤维或无纺布至液体开始渗出为止，37℃干燥过滤形成金标抗体层。

6.如权利要求4或5所述的阪崎肠杆菌金标快速诊断试剂盒的制备方法，其特征在于所述胶体金标记抗体为羊或兔抗阪崎肠杆菌抗体或阪崎肠杆菌单克隆抗体。

7.如权利要求4所述的阪崎肠杆菌金标快速诊断试剂盒的制备方法，其特征在于所述的检测层(8)是在纤维素膜上设有羊或兔抗阪崎肠杆菌抗体或阪崎肠杆菌单克隆抗体构成的检测线(7)和由抗羊或兔抗鼠IgG抗体形成的控制线(6)。

8.如权利要求7所述的阪崎肠杆菌金标快速诊断试剂盒的制备方法，其特征在于所述的固定剂为甲醛或丙酮。