[发明专利]一种检测唾液中HIV抗体的试纸条及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于医学检验领域，尤其涉及一种检测唾液中人类免疫缺陷病毒(HIV)抗体的试纸条及其制备方法。

背景技术

人类免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus，HIV)，是一种感染人类免疫系统细胞的病毒，该病毒破坏人体的免疫能力，导致免疫系统失去抵抗力，而导致各种疾病及癌症得以在人体内生存，发展到最后，导致艾滋病(获得性免疫缺陷综合征)。艾滋病是一种至今无有效疗法的致命性传染病。

艾滋病感染者的治疗费用昂贵，美国第一批艾滋病病人医疗费用为15亿美元；我国专家估算每个艾滋病病人直接间接耗费达15万元左右，预计09年我国艾滋病病人耗费达154亿元；其次针对艾滋病的研究投入惊人，美国每年投入艾滋病防治、科研的经费达数10亿美元，中国自2008年启动艾滋病等重大传染病专项，已投入约100亿。艾滋病感染会极大影响人口素质的提高，目前HIV感染者均为在18-45岁阶段，作为社会财富创造者，他们的死亡对社会经济说是无法弥补的，艾滋病病人及其家属的就业、上学、医疗、婚姻、生育问题，都对社会造成了沉重的负担。近年来母婴垂直传播的比率逐年增长，对于不断强化的人口素质问题是很大的影响。针对目前艾滋病感染既没有有效的疫苗预防，又无特效药物治疗，早期诊断HIV感染是预防、控制HIV扩散的有效手段。

目前，检测HIV主要是血液HIV抗体免疫学检测(如酶联法、印迹法、胶体金法、荧光法等)及血液核酸检测。

①传统免疫学方法：包括初筛试验和确认试验。前者最常用的是酶联免疫吸附试验(ELISA)、斑点免疫渗滤/层析试验等，具有较高的灵敏性和实用性；后者最常用的是免疫印迹试验(Western Blot，WB)，具有较高的特异性。20世纪80年代以后，ELISA技术广泛应用于微生物、病毒等的检测中。

②新免疫学检测技术：(1)免疫复合物裂解检测法(ICD)，敏感性仅为90％，不宜单独使用，但在不具备先进仪器的地方有较大应用价值。(2)超敏感酶免疫测定法(UEI)，即双位点免疫复合物转移酶免疫测定，对试剂要求高，需要一定仪器，操作复杂。(3)免疫吸附电镜法(ISEM)，实现了对病毒颗粒的直接特异性检测，灵敏度高，但需昂贵精密仪器，操作复杂。(4)线性免疫酶测定(LIA)和CobasCore HIV，Combi EIA是新近发展起来的第四代HIV检测技术。

③分子生物学方法：RT-PCR检测法、实时荧光PCR检测技术、支链DNA、连接酶酶促链式反应、核酸序列依赖性扩增以及转录介导的扩增等。PCR的过高灵敏度，操作时容易导致污染，假阳性率较高，PCR检测系统将PCR扩增反应和检测限制在单个反应管中进行。实时荧光定量PCR技术是在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号实时监整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析。但这种新的检测方法依靠手工加样，耗费人力，也存在造成变异的潜在危险。

④基因芯片技术：利用基因芯片对HIV的蛋白酶基因的多态性进行分析。基因芯片技术缩短检测窗口期，加强献血者血液的安全，但耗费高。

中国专利CN20133127Y公开了一种检测HIV抗体的试剂盒，其是利用胶体金标记HIV抗原，利用硝酸纤维素NC膜包被HIV抗原的抗原，根据NC膜C、T线的出现情况，来判定检测结果。然而，该专利公开的试剂盒虽然操作简便，结果易得，但其仍然是利用血液来检测HIV抗体的，使用的是一般的捕获方法，难以实现信号的级联放大。

上述检测方法基本均采用血液检测，需采集患者血清或血浆样本，都存在入侵性或不准确，对患者及操作者均有再次感染的风险，且采血过程属于“有创”过程，不利于HIV检测在家庭、在基层及更广泛人群中推广使用。

近年关于艾滋病的研究表明，HIV感染者的口腔液体含有HIV抗体，其通过口腔粘膜毛细血管渗透到口腔。唾液检测与血液检测一样，遵循同样的筛查和确诊步骤，在采血不实用或不安全的情况下，口腔检测有非侵入性采集样本的优点。

专利申请号为CN101368954A所公开的利用唾液检测HIV的试剂，采用的是渗滤法，配件多，包括长条形的检测盒，圆柱状的集液滤器、柱塞、采样杯、刻度吸管、酸酸缓冲液试剂以及抗人IgG胶体金复合物试剂，操作比胶体金法复杂，不利于一般家庭和个人的自检和推广。