[发明专利]一种萘人工免疫原NA-BSA及其制备方法和用途

说明书

技术领域

本发明属萘的多克隆抗体领域，特别是涉及一种萘人工免疫原NA-BSA的制备及用途。

背景技术

多环芳烃(Polycyclic Aromatic Hydrocarbons，PAHs)是含有两个或两个以上苯环的碳氢化合物的统称，如萘、蒽、菲、荧蒽、苯并芘等。近年来，海上石油开采，轮船运输、海损溢油，工业、生活燃烧废气排放等使得多环芳烃污染日益严重，大量调查研究表明，空气、土壤、水体及生物体等都受到了多环芳烃的污染。多环芳烃是最早发现且数量最多的致癌物，目前已经发现的致癌性多环芳烃及其衍生物已超过400种，占已被发现致癌物质总数的1/3以上。每年排放到大气中的多环芳烃约几十万吨，因其毒性、生物蓄积性和半发挥性以及在环境中的持久存在，已经受到国际科学界的广泛关注。1976年美国环保局提出129种“优先控制污染物”中，多环芳烃类化合物就有16种；欧盟最新有害物质禁令中也列入了16种多环芳烃；1990年我国提出的水中优先控制的68种污染物中，其中多环芳烃类化合物就占7种。

萘是多环芳烃中较常见的物质，是工业上最重要的稠环芳烃，它从炼油的副产品煤焦油中大量生产，是制造某些染料、燃料、润滑剂、苯酐、农药及其它有机化合物的主要原料。作为防蛀剂，还广泛应用于毛织品、皮货、木材等的保存。1958年以来，代替滴滴涕等氯化产品的甲萘威投产以后，用作杀虫剂原料的比例大大增加。人暴露于萘的机会主要在萘的生产和使用过程，另外吸烟和被动吸烟也是一种暴露机会，据报道香烟中含有一定量的萘、甲基萘等，因此美国环保局(EPA)将萘及其衍生物视为普遍存在的环境污染物而受到重视，我国也已规定禁止使用萘作为防蛀剂。因此寻求一种快速、简便、灵敏且经济实用的分析方法成为当前研究的主要方向。

20世纪60年代发展起来的免疫分析(Immunoassay，IA)是基于抗原与抗体的特异性、可逆性结合反应的分析技术。免疫反应涉及抗原与抗体分子间的立体化学、电荷、氢键和偶极间的综合作用，具有常规理化分析技术无可比拟的选择性和高灵敏度，非常适宜于复杂基质中痕量组分的分析。因此，免疫分析具有特异性强、灵敏度高、方便快捷、分析容量大、检测成本低、安全可靠等优点，可以满足简单、快速、灵敏地检测环境激素的要求。

目前关于免疫分析方法检测萘的报道很少。合格的萘抗原是免疫得到合格的萘抗体的重要前提，合格的萘抗体是建立萘免疫检测方法的关键所在。有关萘抗体的制备，国内外报道甚少。

发明内容

要解决的技术问题

本发明要解决的技术问题是提供一种萘人工免疫原NA-BSA的制备及用途，以克服现有检测技术中对萘样品预处理复杂、耗时、且需要大量有机溶剂萃取，以及在检测过程中要用到精密昂贵的检测仪器而不适宜推广使用和不利于当环境污染事件发生在野外时的现场快速检测等缺点。

技术方案

本发明的一种萘人工免疫原NA-BSA，结构式如下：

其中BSA是牛血清白蛋白。

本发明采用活化酯法合成萘人工免疫原，其反应方程式如下：

本发明的一种萘人工免疫原NA-BSA的制备方法，包括以下步骤：

(1)萘半抗原的合成：将丁二酸酐、萘、无水三氯化铝按摩尔比1∶1∶2.2投料，并溶解于硝基苯中，得到无色液体，冰浴下搅拌反应，在0～4℃冰浴下进行7～8小时后，加入稀盐酸终止反应，将烧瓶中的液体倒出，加稀盐酸水解，分离出的有机层用大量稀盐酸水洗后，旋转蒸发除去硝基苯，得到棕黄色固体粉末，在甲醇-乙醚中重结晶获得黄色晶体状的萘半抗原NA，干燥后得纯品；

(2)萘人工免疫原的合成：将溶有N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)和N，N’-二环己基碳酰亚胺(DCC)的有机溶剂逐滴加入溶有萘半抗原的有机溶剂中，冰浴下搅拌反应3～4小时，离心分出上清液，加入到溶有BSA的磷酸缓冲液中，3～6℃下反应12～16小时，将溶液装入透析袋，用pH6～8磷酸缓冲液透析3～6d；透析后离心分出上清液，即得萘人工免疫原NA-BSA偶联物，分装后-10～-40℃保存。

所述步骤(1)中的萘的分子结构式为：

所述步骤(1)中的萘半抗原的化学名称为γ-氧-2-萘丁酸，分子量为228，分子结构式如下：

所述步骤(2)中的有机溶剂是N，N-二甲基甲酰胺(DMF)。

本发明的一种萘人工免疫原NA-BSA的用途，通过免疫动物制备成萘特异性抗体，能与萘发生特异性免疫反应的免疫球蛋白IgG，用于检测水体、土壤及大气中痕量的萘，便于进行现场监测。