[发明专利]一种高含量倍半萜类雷公藤生物碱的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种高含量的倍半萜类雷公藤生物碱单体的制备方法。

背景技术

雷公藤(Tripterygium wilfordii Hook.f.)系卫矛科雷公藤属植物，以根、叶、花及果入药，，对治疗自身免疫性疾病，如类风湿性关节炎、慢性肾炎、红斑狼疮、接触性皮炎等均有显著疗效。据《中国药植志》记载，雷公藤碱、雷公藤定碱及二萜内酯、卫矛醇均有明显的抗肿瘤活性，对小鼠白血病及人类鼻咽癌均有抑制作用，能使周围小动脉舒张增加血流量，减低外围血流的阻力，改善微循环的阻碍，有活血作用。对多种变态性反应与非细菌性炎症有激素样抗炎作用。

雷公藤化学成分复杂，药理作用广泛，有重要的临床应用价值。但由于雷公藤毒副作用大，限制了临床应用的推广。应进一步加强对雷公藤药物化学、药理作用和临床应用的研究，提取、纯化出高效的雷公藤活性成分，为雷公藤中药饮片的质量监控及雷公藤中药材的进一步开发利用研究奠定基础。

雷公藤生物碱是雷公藤的主要活性成分之一，一直是人们研究的主要对象，特别是其中的含量相对较高的雷公藤生物碱，如：雷公藤春碱(wilfortrine)、雷公藤定碱(wilfordine)、雷公藤吉碱(wilforgine)和雷公藤次碱(wilforine)等。目前雷公藤生物碱单体的制备主要采用液/液萃取法结合柱层析色谱法(林绥，李援朝，樱井信子，郭舜民，邓福孝.雷公藤倍半萜生物碱的研究，植物学报，2001，43(6)：647-649；陈俊元，夏志林，邓福孝.雷公藤生物碱提取工艺的改进，中国医药工业杂志，1989，20(11)：484-485)和高速逆流色谱法(High-speed countercurrent chromatography，HSCCC)(CN100422188C)等，主要采用雷公藤根茎为原料，获得的雷公藤生物碱单体含量一般在95％左右或更低一些，其纯度难以满足雷公藤生物碱单体医药用对照品的要求，也不利于雷公藤倍半萜类生物碱药理的进一步研究。

发明内容

本发明的目的在于针对现有雷公藤生物碱单体制备技术的不足，提供一种高含量的雷公藤生物碱单体的半制备色谱分离纯化方法。

高含量倍半萜类雷公藤生物碱单体的制备方法的具体步骤如下：

1)将脱除雷公藤甲素和雷公藤乙素后的雷公藤醋酸乙酯浸膏废液，用5～15g/L的易挥发性有机酸，或5～20g/L的易挥发性碱调节溶液pH值至6-10.5，进行重结晶，重结晶的溶剂为低级醇，重结晶的温度为0～40℃，得到雷公藤粗总生物碱；

2)将雷公藤粗总生物碱，用体积比为55∶45～99∶1的乙腈和水混合溶剂溶解后，使用体积比为55∶45～99∶1的乙腈和水混合溶剂为流动相，以0.2～2.0mL/min的流速，在0～40℃温度范围内，在C18反相半制备色谱柱上实现雷公藤春碱、雷公藤定碱、雷公藤吉碱和雷公藤次碱的分离，通过紫外在线检测，得到雷公藤春碱、雷公藤定碱、雷公藤吉碱和雷公藤次碱。

所述的雷公藤春碱、雷公藤定碱、雷公藤吉碱和雷公藤次碱为倍半萜类生物碱，倍半萜类生物碱的分子结构式：

Ac＝acetate，Bz＝benzoyl，Fur＝furanoyl。

所述的C18色谱柱为普通C18柱。所述的C18色谱柱优选为Hypersil C18色谱柱。

所述的低级醇为甲醇、乙醇或异丙醇。所述的低级醇优选为甲醇。所述的乙腈和水的比例为75∶25，所述的流动相流速为1.0mL/min，所述的柱温为30℃。所述的易挥发性有机酸为醋酸、盐酸或甲酸。所述的易挥发性有机酸优选为醋酸，醋酸浓度为10g/L。所述的易挥发性碱为氨水，氨水的浓度为10g/L。

本发明所用的原料为脱除雷公藤甲素和雷公藤乙素的雷公藤醋酸乙酯浸膏废液，原料价格成本低，属废物利用。所用各种化学试剂通用、易购。色谱分离及收集可实现自动化，操作简便，获得的雷公藤春碱、雷公藤定碱、雷公藤吉碱和雷公藤次碱产品含量高(＞99.0％)，适用于各种型号的半制备色谱仪。

下面结合实施例及附图对本发明做进一步的说明，但不限于本实施例的范围。

附图说明

图1为实施例1的雷公藤生物碱半制备色谱流出紫外色谱图；流动相为乙腈/水＝(60∶40，v/v)的HPLC图；图中，峰1、2、3、4分别为雷公藤春碱、雷公藤定碱、雷公藤吉碱和雷公藤次碱；