[发明专利]一种快速检测三聚氰胺的试剂盒及其应用

说明书

(一)技术领域

本发明涉及原料乳及其加工后袋装纯牛奶中三聚氰胺的快速检测方法及试剂盒。

(二)背景技术

2008年9月我国发生了婴幼儿食用奶粉中毒甚至死亡的重大食品安全事故，追究原因是来自牛奶收购站违规添加“蛋白精”-三聚氰胺所致，这起食品安全事故使我国的奶制品以及相关行业导致重大打击，消费者对奶制品的安全信任下降到最低点，后续波及的相关行业同样受到很大影响，影响到国际贸易以及国家名声。在三鹿奶粉事件之前，我国未曾建立有食品中三聚氰胺测定方法，很少有三聚氰胺快速检测技术。在国家质检总局的主持下，2008年10月7日国家标准委员会发布GB/T22388-2008原料乳和乳制品中三聚氰胺检测方法，规定了液相色谱、气相色谱质谱法、液相色谱质谱法三种标准测定方法，但是三种方法均需要大型精密仪器、熟练操作人员，复杂的样品前处理，目前检测部门收费一般为200元/份-1000元/份，目前我国已经规定对液态乳制品进行批批检测，上述方法显然不能满足乳制品行业生产检测要求，开发快速、简便的测定方法非常重要。目前针对液态奶中三聚氰胺快速检测方法，国外除了ELISA法外，还没见其他方法，国内还没有三聚氰胺抗体生产报道，且ELISA需要一定的仪器设备和较熟练的操作人员，对样品数量少的检测(同样需要制定标准曲线)，且成本较高，时间需要1.0小时以上。

国家科技部于2008年9月28日向社会公开征集液态奶中三聚氰胺快速检测技术和产品。国内10月10日由国家质检总局的主持的现场盲样考试中，使用的方法原理主要有离子色谱、ELISA、毛细管电泳、显微镜目视法、显色法等等。在结果公示中存在以下问题：有些方法需要大型仪器设备，至少几十万，仪器维护使用成本高；有些方法定性不准确，特异性差等缺点。

本发明采用化学浊度法开发原料奶及其加工后袋装纯牛奶中三聚氰胺快速检测试剂盒，优化各种条件，使各种指标满足科技部招标要求，同时使用者不需要增加大型仪器设备投入，以及特殊要求的操作人员，该产品的开发成功为促进奶制品的行业的健康发展以及打击三聚氰胺的违法使用保障食品安全具有非常重要意义。

(三)发明内容

本发明要解决的第一个技术问题是提供一种三聚氰胺检测试剂盒。

一种三聚氰胺检测试剂盒，包括蛋白沉淀剂A、淋洗试剂B、洗脱试剂C以及显示剂D，所述的蛋白沉淀剂A选自下列之一：甲醇、乙腈、1wt％三氯乙酸水溶液、2wt％乙酸铅水溶液、1wt％三氯乙酸水溶液与乙腈按照体积比1∶0.5～2混合得到的混合溶液、1wt％亚铁氰化钾水溶液与2wt％乙酸锌水溶液按照体积比1∶1昆合得到的混合溶液；所述的淋洗试剂B为30～60mmol/L盐酸溶液；所述的洗脱试剂C为3～6vol％氨化甲醇；所述的显示剂D选自下列之一：0.5wt％苦味酸水溶液、0.5wt％氯化汞水溶液、0.5wt％三聚氰酸水溶液、体积比为1∶0.5～1.2的0.5wt％氯化汞水溶液与0.5wt％三聚氰酸水溶液形成的混合溶液。

进一步，所述的蛋白沉淀剂A优选为1wt％三氯乙酸水溶液与乙腈按照体积比1∶0.5～2混合得到的混合溶液；更优选1wt％三氯乙酸水溶液与乙腈按照体积比1∶1昆合得到的混合溶液。

进一步，所述的显示剂D优选为体积比为1∶0.5～1.2的0.5wt％氯化汞水溶液与0.5wt％三聚氰酸水溶液形成的混合溶液；更优选体积比为1∶1的0.5wt％氯化汞水溶液与0.5wt％三聚氰酸水溶液形成的混合溶液。

本发明所述的淋洗试剂B和洗脱试剂C是SCX+C8固相萃取柱对应的淋洗试剂和洗脱试剂，其中淋洗试剂B优选50mmol/L盐酸溶液，洗脱试剂C优选5vol％氨化甲醇。本发明中氨化甲醇的浓度为体积浓度，由25～28wt％氨水和甲醇配制得到，比如5％氨化甲醇中25～28wt％氨水与甲醇体积比为5∶95。

更进一步，本发明优选所述的试剂盒包括蛋白沉淀剂A、淋洗试剂B、洗脱试剂C以及显示剂D，所述的蛋白沉淀剂A为1wt％三氯乙酸水溶液与乙腈按照体积比1∶1昆合得到的混合溶液；所述的淋洗试剂B为50mmol/L盐酸溶液；所述的洗脱试剂C为5vol％氨化甲醇；所述的显示剂D为体积比为1∶1的0.5wt％氯化汞水溶液与0.5wt％三聚氰酸水溶液形成的混合溶液。

本发明要解决的第二个技术问题是提供一种上述三聚氰胺检测试剂盒在快速检测三聚氰胺中的应用。