[发明专利]人类白细胞抗原HLA-A、B基因全长序列测定以及HLA基因测序分型方法

权利要求书

1.一种人类白细胞抗原HLA-A、-B基因全长序列测定方法，其特征在于，该方法包括：

a、各由一对位点特异性PCR扩增引物对HLA-A基因的4.3kb全长序列，HLA-B基因的3.7kb全长序列进行PCR扩增，扩增采用高保真的聚合酶(Pfuultra II Fusion HS DNA polymerase)，扩增区域包含两个基因的5’-启动子序列，所有外显子，所有内含子，以及3’-UTR序列；

b、将HLA-A 4.3kb扩增产物以及HLA-B 3.7kb扩增产物进行末端加碱基‘A’反应并克隆至pGEM-Teasy载体当中，挑选阳性克隆、提取质粒、分别通过载体两端引物以及正、反双向十条保守步移测序引物将两个基因的全长序列测通，共获得中国汉族个体HLA-A 38种等位基因的4.3kb全长序列，HLA-B 30种等位基因的3.7kb全长序列。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(a)中，扩增HLA-A 4.3kb全长序列的PCR引物包括上游引物A-genome-F和下游引物A-genome-R，其中，上游引物A-genome-F的序列为：5′-ACTCAGAGCTAWGGAATGATG-3′，下游引物A-genome-R的序列为：5′-ACC 5′-ATGGAGCAGCAAAGATGAC-3′；扩增HLA-B 3.7kb全长序列的PCR引物包括上游引物B-genome-F和下游引物B-genome-R，其中，上游引物B-genome-F的序列为：5′-CCAGTTCARGGACAGGGATTC-3′，下游引物B-genome-R  的序列为：5′-AACAGACTCAGCACAGCRAAC-3′。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述HLA-A 4.3kb全长序列的PCR扩增引物以及HLA-B 3.7kb全长序列的扩增引物，扩增区域包含两个基因的5’-启动子序列，所有外显子，所有内含子，以及3’-UTR序列；上游扩增引物A-Genome-F及B-Genome-F分别位于HLA-A、-B基因的5’-启动子上游，下游扩增引物A-Genome-R及B-Genome-R分别位于HLA-A、-B基因的3’-UTR下游，将有多态性的碱基设计为简并碱基，可同时扩增HLA-A、-B基因所有不同子系的等位基因全长序列。