[发明专利]温郁金1号的组织培养法

说明书

技术领域

本发明涉及一种温郁金1号的组织培养法。

背景技术

温郁金具有抗肿瘤、抗炎、抗氧化、抗艾滋病等多种药理活性，临床上用于治疗肺癌、肝癌、乳腺癌、胸腹水等。其在浙南有一千多年的栽培历史，主产地浙江瑞安，且多栽培，少野生。但因多年种植、管理混乱，并随着环境污染及土壤营养贫瘠等日趋严重，导致温郁金药材种质退化、品质下降，这严重影响了温郁金药材产业的发展。

温郁金1号作为温郁金的品种之一，可由乐清市源生中药材种植有限公司提供。目前现有的温郁金1号的培育法为种茎繁殖，该方法具有如下缺陷：年繁殖率仅为25倍左右。

温郁金脱毒组织培养技术研究(汪洪，2009，药物生物技术)公开了一种温郁金的培养方法，该方法具有如下不足之处：不定芽的繁殖系数低，仅为2～4倍；增殖周期长，约为4周；而且在不定芽增殖过程中，根原基被诱导，发育成大量根系，不定芽和不定根的同时生长不仅严重影响了增殖效率，而且使不定芽的继代分割不易操作，最终导致种苗质量下降，移栽成活率低，仅达85％。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种温郁金1号的组织培养法，采用该方法能快速获得大量的温郁金1号组培种苗。

为了解决上述技术问题，本发明提供一种温郁金1号的组织培养法，依次包括以下步骤：

1)、将无病斑、无虫瘿且健壮饱满的温郁金1号块根放入生化培养箱进行催芽，直至长成0.5～2.0cm高的小芽；培养条件为：26～28℃暗培养；

2)、割取上述小芽进行流水冲洗；

3)、将上述流水冲洗后的小芽经常规消毒后，剥取3～5毫米大小的茎尖作为外植体接种到无菌苗培养基上进行培养；培养条件为：16小时光照，光照强度30～40μmol m^-2.s^-1，温度为27±1℃；8小时暗培养，温度为21±1℃；上述光照和暗培养交替进行；

4)、待上述茎尖长至1.0～2.0cm高时进行割取作为小苗Ⅰ；将上述小苗Ⅰ接种到不定芽诱导培养基上进行培养；培养条件为：16小时光照，光照强度30～40μmol m^-2.s^-1，温度为27±1℃；8小时暗培养，温度为21±1℃；上述光照和暗培养交替进行；

5)、待从小苗Ⅰ上诱导出的不定芽Ⅰ长到1.0～3.0cm高时，割取不定芽Ⅰ作为小苗Ⅱ；将上述小苗Ⅱ接种到增殖培养基上进行培养；培养条件为：16小时光照，光照强度30～40μmol m^-2.s^-1，温度为26～28℃；8小时暗培养，温度为20～22℃；上述光照和暗培养交替进行；

6)、待上述小苗Ⅱ上长出的不定芽Ⅱ长到3.0～6.0cm高时，割取不定芽Ⅱ作为小苗Ⅲ；将此小苗Ⅲ接种到生根培养基中；培养条件为：16小时光照，光照强度40～50μmol m^-2.s^-1，温度为26～28℃；8小时暗培养，温度为20～22℃；上述光照和暗培养交替进行；

7)待上述小苗Ⅲ长到高4～8cm且具有至少3条长于2cm的根时，得可出瓶种植的种苗。

作为本发明的温郁金1号的组织培养法的改进：将温郁金1号的小芽放入纱袋中，无菌水冲洗1～2小时。

作为本发明的温郁金1号的组织培养法的进一步改进：

步骤3)中的无菌苗培养基为：1/2MS基本培养基+白砂糖20～30g/l+琼脂4～9g/l，pH为5.5～6.0；

步骤4)中的不定芽诱导培养基为：MS基本培养基+TDZ 0.05～0.5mg/l+白砂糖20～30g/l+琼脂4～9g/l，pH为5.5～6.0。

步骤5)中的增殖培养基为：MS基本培养基+TDZ 0.05～0.5mg/l+白砂糖20～30g/l+琼脂4～9g/l，pH为5.5～6.0。

步骤6)中的生根培养基为：1/2MS基本培养基+白砂糖15～20g/l+琼脂4～10g/l，pH为5.5～6.0。

在本发明中：

无菌苗培养基的制作方法具体如下：以1/2MS基本培养基(即溶液中所有物质的含量为MS基本培养基的一半)为基础，分别加入白砂糖、琼脂均匀混合，利用1mol/L的KOH或1mol/L的HCl调节pH为5.5～6.0；每1L的1/2MS基本培养基中加20～30g白砂糖、4～9g琼脂。