[发明专利]肠出血性大肠杆菌O157:H7多色量子点快速检测试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.肠出血性大肠杆菌O157：H7多色量子点快速检测试剂盒，其特征在于：包含以下试剂：

①固定在固相载体上的捕获探针；

②分别用荧光发射波长互不重叠的量子点标记的三种检测探针：O157抗原编码基因rfbE探针、溶血性基因HlyAB探针和志贺毒素基因stx2探针；

③核酸样本的PCR扩增引物A组或B组：所述PCR扩增引物A组用于扩增分别包含O157抗原编码基因rfbE片段、溶血性基因HlyAB片段和志贺毒素基因stx2片段中的一种、以及与捕获探针结合片段的PCR产物；所述PCR扩增引物B组用于扩增同时包含O157抗原编码基因rfbE片段、溶血性基因HlyAB片段、志贺毒素基因stx2片段、以及与捕获探针结合片段的PCR产物。

2.根据权利要求1所述肠出血性大肠杆菌O157：H7多色量子点快速检测试剂盒，其特征在于：所述捕获探针的核苷酸序列为肠出血性大肠杆菌16SrDNA保守序列的互补序列，所述PCR产物中与捕获探针结合片段的核苷酸序列为肠出血性大肠杆菌16S rDNA保守序列。

3.根据权利要求1所述肠出血性大肠杆菌O157：H7多色量子点快速检测试剂盒，其特征在于：所述O157抗原编码基因rfbE探针序列如SEQ ID No.1所示，所述溶血性基因HlyAB探针序列如SEQ ID No.2所示，所述志贺毒素基因stx2探针序列如SEQ ID No.3所示。

4.根据权利要求1所述肠出血性大肠杆菌O157：H7多色量子点快速检测试剂盒，其特征在于：所述量子点的荧光发射波长在420～680nm范围内。

5.根据权利要求1至4任一项所述肠出血性大肠杆菌O157：H7多色量子点快速检测试剂盒，其特征在于：所述PCR扩增引物A组包括以下三对特异性引物：扩增O157抗原编码基因rfbE的特异性引物，其上、下游引物序列分别如SEQ ID No.4和SEQ ID No.5所示；扩增溶血性基因HlyAB的特异性引物，其上、下游引物序列分别如SEQ ID No.6和SEQ ID No.7所示；扩增志贺毒素基因stx2的特异性引物，其上、下游引物序列分别如SEQ ID No.8和SEQ ID No.9所示。

6.根据权利要求1至4任一项所述肠出血性大肠杆菌O157：H7多色量子点快速检测试剂盒，其特征在于：所述PCR扩增引物B组为通用引物，其上、下游引物序列分别如SEQ ID No.10和SEQ ID No.11所示。

7.权利要求1所述肠出血性大肠杆菌O157：H7多色量子点快速检测试剂盒的检测方法，其特征在于：包括以下步骤：

a、取疑是肠出血性大肠杆菌O157：H7感染的核酸样本，经常规预处理后，采用试剂盒提供的PCR扩增引物A组或B组进行PCR扩增，获得相应的PCR产物；

b、将步骤a所得PCR产物与试剂盒提供的固定在固相载体上的捕获探针进行杂交反应，反应完成后，取固相载体，经充分洗涤后，再与三种量子点标记的检测探针进行杂交反应，反应完成后，取固相载体，经充分洗涤后进行荧光检测，通过每种检测探针所标记量子点的荧光发射波长和荧光强度对相应靶基因片段进行检测，最后根据三种靶基因片段的检测结果确定样本中是否含有肠出血性大肠杆菌O157：H7。