[发明专利]一种泽泻醇A的提纯方法

说明书

技术领域：

本发明涉及一种泽泻醇A的提纯方法，尤其是涉及一种用大孔树脂富集和逆流色谱分离手段纯化泽泻醇A的方法。

背景技术：

泽泻醇A，三萜类物质。

分子式：C₃₀H₅₀O₅

理化性质：无定形体，[α]23D+99.6°(氯仿)。溶于乙酸乙酯、丙酮、氯仿。微溶于甲醇、乙醇，不溶于水和石油醚。

实验证明，泽泻醇A与含有1％胆固醇、2％胆酸钠及0.2％氯化胆碱的食物同时喂养雄性大鼠时，十天后测量治疗组和对照组血液中胆固醇含量，发现能明显降低血液中胆固醇水平。泽泻醇A可以用作治疗肝炎，不易产生耐药性性，而且毒副作用低，市场前景较好。

高速逆流色谱(high-speed countercurrent chromatography，HSCCC)是20世纪80年代发展起来的一种连续高效的液-液分配色谱分离技术，它不用任何固态的支撑物或载体。它利用两相溶剂体系在高速旋转的螺旋管内建立起一种特殊的单向性流体动力学平衡，当其中一相作为固定相，另一相作为流动相，在连续洗脱的过程中能保留大量固定相。

由于不需要固体支撑体，物质的分离依据其在两相中分配系数的不同而实现，因而避免了因不可逆吸附而引起的样品损失、失活、变性等，不仅使样品能够全部回收，回收的样品更能反映其本来的特性，特别适合于天然生物活性成分的分离。而且由于被分离物质与液态固定相之间能够充分接触，使得样品的制备量大大提高，是一种理想的制备分离手段。

它相对于传统的固-液柱色谱技术，具有适用范围广、操作灵活、高效、快速、制备量大、费用低等优点。目前HSCCC技术正在发展成为一种备受关注的新型分离纯化技术，已经广泛应用于生物医药、天然产物、食品和化妆品等领域，特别在天然产物行业中已被认为是一种有效的新型分离技术；适合于中小分子类物质的分离纯化。

目前，提取泽泻醇A的方法多是有机试剂提取或超临界萃取，再大孔树脂分离或硅胶柱分离。所得泽泻醇A要么含量较低，要么成本较高、制备量小。

如专利(申请号200810197317.3)“一种泽泻三萜类化合物提取纯化工艺”，该专利公开的方法是甲醇提取，提取液浓缩后乙酸乙酯萃取，萃取物乙醇溶解上大孔树脂柱吸附，得总三萜类化合物。

再如专利(申请号03124066.6)“泽泻甾醇提取物及其制备方法、质量控制方法”，该专利公开的方法是采用超临界CO₂流体萃取泽泻制得泽泻总甾醇提取物。

还有专利“治疗乙型肝炎的药物组合物”，该专利公开的方法是乙醇回流提取，浓缩液氯仿萃取，硅胶柱分离，重结晶得针状结晶泽泻醇A。

文献“草泽泻三萜类化学成分的研究”，提供的方法是乙醇提取，石油醚、乙酸乙酯萃取，再硅胶柱分离得泽泻醇各种单体。

文献“大孔树脂法纯化泽泻总萜醇类成分的实验研究”公开的是大孔树脂对泽泻醇的纯化方法。

发明内容：

本发明要解决技术问题是提供一种连续生产、处理大、含量高的泽泻醇A的提纯方法。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：

一种泽泻醇A的提纯方法，其特征在于包含以下步骤：

1)提取脱色：取泽泻药材粉碎40-80目，加入8-15倍量70-90％乙醇溶液，回流提取1-3小时，2-3次，合并提取液加活性炭脱色，滤过得脱色液；

2)大孔树脂吸附：把上述提取液回收乙醇，再加适量水分散，保持温度60-80℃加入大孔树脂柱吸附，水醇梯度洗脱，收集有效成分洗脱液减压回收乙醇，放置沉淀；

3)结晶：上述沉淀物滤出，加入5-8倍量35-40％乙醇溶液回流洗涤，冷却常温，过滤不溶物，用无水乙醇回流溶解结晶；

4)高速逆流色谱分离：把上述结晶物滤出，选用庚烷-二氯甲烷-乙腈的溶剂系统，采用高速逆流色谱仪分离，制得泽泻醇A。

所述步骤1)中活性炭为针剂类药用活性炭，用量为溶液量0.3-0.5％。

所述步骤2)中大孔树脂型号可选D101、AB-8、HZ816或HPD-100中的一种，洗脱剂为10-20BV水→5-7BV20-40％乙醇溶液→5-8BV60-90％乙醇溶液。

所述步骤4)中溶剂比例为庚烷(8-13)∶二氯甲烷(2-5)∶乙腈(5-9)。

本发明的优点是：