[发明专利]一种链酶亲和素结合功能荧光磁性纳米颗粒的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于纳米材料技术领域，具体的说是涉及一种链酶亲和素结合功能荧光磁性纳米颗粒的制备方法。

背景技术

20世纪80年代，随着扫描隧道显微镜(STM)、原子力显微镜(AFM)等微观表征和操纵技术的诞生与发展，纳米技术应运而生。其中，磁性纳米粒子具有良好的超顺磁性以及表面易功能化，引起了越来越多的关注。经过表面修饰的超顺磁性纳米粒子，可以应用于生物固定化、分离、修饰和检测，从而起到提取或者测定一系列生物活性化合物、异生化合物、胞内组分或者细胞本身的作用。

除此之外，荧光标记探针技术，作为一种常用的生物分析技术，具有灵敏度高、选择性好、特异性高、精确性好、直观可视化等特点，被广泛用于流式细胞技术、免疫分析、分子生物学、细胞分析及细胞凋亡、对肿瘤细胞的识别等多个领域的研究。目前常用的荧光标记物包括有机荧光染料、荧光半导体量子点材料、普通稀土荧光材料和上转换稀土材料等。小分子有机染料作为生物荧光探针已被广泛应用于诊断学和分子成像等生命科学中。然而大多数有机荧光探针对光不稳定，且荧光光谱较宽，易受样品本身荧光信号背景的干扰。纳米探针技术如无机发光量子点和荧光纳米乳液微球，克服了有机染料的一些缺点。但是无机发光量子点由于其水溶性较差、黏度大、量子产率较低、且含有毒的金属镉化合物，因而在生物医学等领域受到一定的限制。因此，有机高分子纳米颗粒及以氧化硅为代表的无机纳米颗粒等作为负载荧光分子的基质已成为纳米荧光探针的研究热点之一。

超顺磁性纳米荧光颗粒是同时具有磁性操纵分离功能和荧光标记功能的多功能纳米材料，纳米级的粒径使其能作为标记物和蛋白、核酸等生物分子联接，并具有磁性分离和载送等特性，同时它本身带有的荧光物质能起到示踪和检测的作用。

发明内容

本发明目的在于提供一种链酶亲和素结合功能荧光磁性纳米颗粒的制备方法。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

一种链酶亲和素结合功能荧光磁性纳米颗粒的制备方法：

1)通过PCR反应将Strep II标签基因分别连在别藻蓝蛋白APC的α和β亚基脱辅基蛋白基因的N末端，分别得到Strep II-apcA和Strep IIapcB基因片段，待用；

2)将Strep II-apcA基因片段插入到带有6×His基因的载体A中6×His基因的下游，同时将藻胆素生物合成酶基因hol和pcyA插入到载体上，得到pCDF-Strep II-apcA-hol-pcyA，待用；

将Strep II-apcB基因片段插入到带有6×His基因的载体B中6×His基因的下游，同时将色基裂合酶基因cpcS和cpcU插入到载体上，得到pRSF-Strep II-apcB-cpcS-cpcU，待用；

3)将步骤2)所得两个表达载体同时转化大肠杆菌，筛选获得同时表达上述基因的工程菌；

4)将上述工程菌诱导培养后分离纯化，得到双标签重组APC荧光蛋白质；

5)将所得双标签重组APC荧光蛋白质与锌离子修饰的超顺磁性硅壳纳米颗粒振荡混合，即得到链酶亲和素结合功能荧光磁性纳米颗粒。

所述步骤1)构建Strep II-apcA基因片段时，采用Synechocystis sp.PCC6803基因组DNA为模板，以A1和A2为引物，进行PCR扩增；A1：5’AAGGATCCGAGTAACTGGTCACACCCACAATTCGAGAAAATGAGTATCGTCACGAA3’；A2：5’GCGAGCTCCTAGCTCATTTTTCCGAT3’；

所述步骤1)构建Strep II-apcB基因片段时，采用Synechocystis sp.PCC6803基因组DNA为模板，以B1和B2为引物，进行PCR扩增；B1：5’AAGGATCCGAGTAACTGGTCACACCCACAATTCGAGAAAATGCAAGACGCAATTAC3’；B2：5’CCGAGCTCCTAGCTCAAGCCAGAGC3’。

所述步骤2)带有6×His基因的载体A为pCDFDuet载体；带有6×His基因的载体B为pRSFDuet载体。