[发明专利]一种链酶亲和素结合功能荧光磁性纳米颗粒的制备方法

权利要求书

1.一种链酶亲和素结合功能荧光磁性纳米颗粒的制备方法，其特征在于：

1)通过PCR反应将Strep II标签基因分别连在别藻蓝蛋白APC的α和β亚基脱辅基蛋白基因的N末端，分别得到Strep II-apcA和Strep II-apcB基因片段，待用；

2)将Strep II-apcA基因片段插入到带有6×His基因的载体A中6×His基因的下游，同时将藻胆素生物合成酶基因hol和pcyA插入到载体上，得到pCDF-Strep II-apcA-hol-pcyA，待用；

将Strep II-apcB基因片段插入到带有6×His基因的载体B中6×His基因的下游，同时将色基裂合酶基因cpcS和cpcU插入到载体上，得到pRSF-Strep II-apcB-cpcS-cpcU，待用；

3)将步骤2)所得两个表达载体同时转化大肠杆菌，筛选获得同时表达上述基因的工程菌；

4)将上述工程菌诱导培养后分离纯化，得到双标签重组APC荧光蛋白质；

5)将所得双标签重组APC荧光蛋白质与锌离子修饰的超顺磁性硅壳纳米颗粒振荡混合，即得到链酶亲和素结合功能荧光磁性纳米颗粒。

2.按权利要求1所述的链酶亲和素结合功能荧光磁性纳米颗粒的制备方法，其特征在于：所述步骤1)构建Strep II-apcA基因片段时，采用Synechocystis sp.PCC6803基因组DNA为模板，以A1和A2为引物，进行PCR扩增；A1：5’AAGGATCCGAGTAACTGGTCACACCCACAATTCGAGAAAATGAGTATCGTCACGAA3’；A2：5’GCGAGCTCCTAGCTCATTTTTCCGAT3’；

所述步骤1)构建Strep II-apcB基因片段时，采用Synechocystis sp.PCC6803基因组DNA为模板，以B1和B2为引物，进行PCR扩增；B1：5’AAGGATCCGAGTAACTGGTCACACCCACAATTCGAGAAAATGCAAGACGCAATTAC3’；B2：5’CCGAGCTCCTAGCTCAAGCCAGAGC3’。

3.按权利要求1所述的链酶亲和素结合功能荧光磁性纳米颗粒的制备方法，其特征在于：所述步骤2)带有6×His基因的载体A为pCDFDuet载体；带有6×His基因的载体B为pRSFDuet载体。

4.按权利要求1或2所述的链酶亲和素结合功能荧光磁性纳米颗粒的制备方法，其特征在于：所述步骤2)中Strep II-apcA基因片段、Strep II-apcB基因片段、pCDFDuet载体和pRSFDuet载体均用限制性内切酶BamH I和Sac I进行双酶切，而后Strep II-apcA基因酶切片段通过T4连接酶连接到酶切后的pCDFDuet载体上得到pCDFDuet-Strep II-apcA，Strep II-apcB基因酶切段片通过T4连接酶连接到酶切后的pRSFDuet载体上得到pRSFDuet-Strep II-apcB；上述酶切片段与载体按照体积份数比为3-7∶1的比例连接；

藻胆素生物合成酶基因hol和pcyA经过相应酶切后，依次与载体pCDFDuet-Strep II-apcA连接，得到表达载体pCDF-Strep II-apcA-hol-pcyA；色基裂合酶基因cpcS和cpcU经过相应酶切后，依次连接到pRSFDuet-StrepII-apcB，得到表达载体pRSF-Strep II-apcB-cpcS-cpcU；上述酶切片段与载体按照体积份数比为3-7∶1的比例连接。

5.按照权利要求1中所述的链酶亲和素结合功能荧光磁性纳米颗粒的制备方法，其特征在于：所述步骤5)中所述的锌离子修饰的超顺磁性硅壳纳米颗粒为经锌离子修饰的以二氧化硅为壳以四氧化三铁为核的超顺磁性硅壳纳米颗粒。