[发明专利]一种表达弹性蛋白酶2B的基因工程菌、其构建方法及应用

权利要求书

1.含有ELA2B基因的表达载体，所述ELA2B基因具有Seq ID No：1所示的核苷酸序列。

2.如权利要求1所述的表达载体，其特征在于，出发载体为pPIC9K。

3.含有权利要求2所述表达载体的工程菌，其特征在于，出发菌株为毕赤酵母。

4.如权利要求3所述的工程菌，其特征在于，出发菌株为毕赤酵母GS115。

5.构建权利要求3或4所述工程菌的方法，其特征在于，其包括步骤：

1)从人体肾脏组织中提取总RNA，经RT-PCR扩增得到ELA2B基因；

2)将步骤1)中得到的ELA2B基因插入到表达载体中；

3)将步骤2)中构建的表达载体转入毕赤酵母，并筛选阳性克隆，得到重组毕赤酵母工程菌。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤3)中所述筛选阳性克隆包括：用MD培养基初步筛选阳性克隆，再用G418抗性进行二次筛选，得到具有弹性蛋白基因高拷贝数的克隆，最后采用酪蛋白-MM平板诱导法，筛选得到高分泌表达的重组菌株。

7.权利要求3或4所述的工程菌在生产弹性蛋白酶2B中的应用。