[发明专利]一种HLA基因分型的PCR-SBT方法及其试剂

权利要求书

1.一种HLA基因分型的PCR-SBT方法，其特征在于它对HLA-A位点1-7外显子、HLA-B位点1-7外显子、HLA-C位点1-7外显子进行基因分型，包括以下步骤：

（1）、制备人基因组DNA；

（2）、设计扩增引物，用聚合酶链反应分别扩增人基因组DNA中HLA-A、HLA-C位点基因外显子1-8全长序列和HLA-B位点基因外显子1-7全长序列；

（3）、将步骤（2）得到的扩增产物进行双酶切纯化；

（4）、设计测序引物，将步骤（3）得到的纯化产物进行测序PCR反应；

（5）、将步骤（4）得到的测序产物进行醋酸钠-乙醇沉淀法纯化，进行毛细管电泳测序；

（6）、将步骤（5）获得的序列通过软件分析，确定其基因型。

2.如权利要求1所述的一种HLA基因分型的PCR-SBT方法，其特征在于所述步骤（2）中的引物为：

HLA-A基因组全长扩增引物对HLA-AF1和HLA-AR或者HLA-AF2和HLA-AR，

HLA-AF1：5’-TGTCGGGTTTCCAGAGAAGC-3’

HLA-AF2：5’-GGGTTTCCAGAGAAGCCAAT-3’

HLA-AR：5’-TTGGGGAGGGAGCACAGGTCAGCGTGGGAAG-3’；

HLA-B基因组全长扩增引物对HLA-BF1和HLA-BR或者HLA-BF2和HLA-BR，

HLA-BF1：5’-GGCAGACAGTGTGACAAAGAGGC-3’

HLA-BF2：5’- GAGTTTCACTTCTTCTCCCAAC-3’

HLA-BR：5’- CTGGGGAGGAAACACAGGTCAGCATGGG-3’；

HLA-C基因组全长扩增引物对HLA-CF1和HLA-CR或者HLA-CF2和HLA-CR，

HLA-CF1：5’- TCAGGCACACAGTGTGACAAAGAT-3’

HLA-CF2：5’- CCAATTCCCACTCCCATTG-3’

HLA-CR：5’- TCGGGGAGGGAACACAGGTCAGTGTGGGGAC-3’；

所述步骤（4）中的引物为用于测序分析的36条寡核苷酸测序引物； 

HLA-A外显子1-7的测序引物：

HLA-A1F：5’- GGGTTTCCAGAGAAGCCAAT-3’

HLA-A1R：5’- CMCGACCCCGCACTCACC-3’

HLA-A2F：5’- GCCTCTGYGGGGAGAAGC-3’

HLA-A2R：5’-GCCCGTCCGTGGGGGATGA-3’

HLA-A3F：5’- CCCACAGTCTCCGGGTCCGA-3’

HLA-A3R：5’- GTCCCAAWTGTCTCCCCTCCTT-3’

HLA-A4F：5’- GGTGTSCTGTCCATTCTCAAG-3’

HLA-A4R：5’-GACACCCCCRTCTCCCTC -3’

HLA-A5F：5’- CCACAAGGAGGGGAGACAAT-3’

HLA-A5R：5’- CACCTGAGCTRTTCCTCCTC-3’

HLA-A67F：5’- CACATTTCTGGAAACTTCTCTG-3’

HLA-A67R：5’- CGCATGCTCAATACATCCAA-3’；

HLA-B外显子1-7的测序引物：

HLA-B1F：5’- GIGGTCCCAGTTCTAAAGTCC-3’

HLA-B1R：5’- ACTCACCRGCCCAGGTCT-3’

HLA-B2F：5’- GCCGCGCCGGKAGGAGGGTC-3’

HLA-B2R：5’- GACCCSGGCCGTMCGT-3’

HLA-B3F：5’- ACCICGIGGICIGGGCCAG-3’

HLA-B3R：5’- GGCCATCCCCGSCGACCTAT-3’

HLA-B4F：5’- GGTCACATGGGTGGTCCTAG-3’

HLA-B4R：5’- GGGCTCCTGCTTTCCCTG-3’

HLA-B5F：5’- GTCRGGRCCCCTCRTCTTC-3’

HLA-B5R：5’- TTCATTGTCACATGTGCTG-3’

HLA-B67F：5’- GTCCAGGACCCACACTTGCT-3’

HLA-B67R：5’- CCCACTCTAGACCCCAAGAA-3’；

HLA-C外显子1-7的测序引物：

HLA-C1F：5’- CCAATTCCCACTCCCATTG-3’

HLA-C1R：5’- TCCYAACCYCGCACTCAC-3’

HLA-C2F：5’- GACCCGGGGAGCCGCGCA-3’

HLA-C2R：5’- CGACCCGGG CCGTCCGTG-3’

HLA-C3F：5’- ACCICGIGGICIGGGCCAG-3’

HLA-C3R：5’-AGGCCATICCGGGAGATCTA -3’

HLA-C4F：5’- GGTGTCCTGTCCITTCTCA-3’

HLA-C4R：5’- GICTICTGCTTTCICTGA-3’

HLA-C5F：5’- GCCCTTCAGCYRGGTCAG-3’

HLA-C5R：5’- ACTTCTACCTGGGGCTTGAA-3’

HLA-C67F：5’- GGGTCCAAGACTAGGAGGTT-3’

HLA-C67R：5’- CACCACACATTCGAAACGTC-3’。