[发明专利]一种泥蚶线粒体COI基因扩增引物的筛选方法

权利要求书

1.一种泥蚶线粒体COI基因扩增引物的筛选方法，其特征是a、登陆美国国立生物技术信息中心，下载已有的泥蚶线粒体COI序列；b、将下载的序列用BioEdit软件比对分析，确定序列两端保守区域；c、在确定的保守区域用引物设计软件Primer Premier 5设计多对引物，送交上海生工生物技术有限公司合成；d、将泥蚶个体提取DNA，然后分别和合成的多对引物在反应体系下进行PCR反应，检测引物的扩增情况；e、进行琼脂糖凝胶电泳检测，筛选出条带单一、扩增效率高的一对引物COINF和COINR：COINF为5’TTGATAGGGATCTGTTTAAGA 3’；COINR为5’GCCAATACAGGCAAAGAAA 3’。

2.如权利要求1所述的泥蚶线粒体COI基因扩增引物的筛选方法，其特征是所述的泥蚶线粒体COI序列的Genbank登录号为EF583524-583540和FJ411459-411480。

3.如权利要求1所述的泥蚶线粒体COI基因扩增引物的筛选方法，其特征是所述的PCR反应条件为94℃预变性3min，94℃变性1min，52℃退火温度1min，72℃延伸1min，共35个循环，最后72℃延伸5min。

4.如权利要求1所述的泥蚶线粒体COI基因扩增引物的筛选方法，其特征是所述的琼脂糖凝胶电泳用的琼脂糖质量百分数浓度为1.5％。

5.如权利要求1所述的泥蚶线粒体COI基因扩增引物的筛选方法，其特征是所述的扩增效率高的一对引物COINF和COINR的扩增效率大于90％。