[发明专利]一种检测样品中是否含有重金属铜离子的方法及其专用试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测样品中是否含有重金属铜离子的方法及其专用试剂盒。

背景技术

重金属是环境与农产品中的重要污染物质，可以通过食物链在动物及人的体内富集，对人类健康会带来严重的危害。铜是生命体生长所必须的微量元素之一，但是高浓度的铜会对生命体产生毒害作用。

目前，重金属铜的分析方法主要有原子吸收光谱法、电感耦合等离子体发射光/质谱法、X-射线荧光光谱法、电位溶出分析法以及近几年发展的生物传感器检测法等。但是用这几种方法检测铜离子需要昂贵的仪器设备，检测费用高，耗时，不能用于现场快速检测。与仪器分析法相比，酶联免疫吸附测定法(ELISA)具有快速、简便、实时、易于进行现场检测、样品前处理简单、灵敏度高、选择性强、适合于高通量分析等优点，而且还能大幅度降低检测成本。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种用于检测样品中是否含有重金属的试剂盒。

本发明所提供的用于检测样品中是否含有重金属的试剂盒，包括包被原、抗待检重金属的抗体；所述包被原与抗待检重金属的抗体结合，且所述包被原与所述抗待检重金属的抗体的亲和力小于所述待检重金属与所述抗待检重金属的抗体的亲和力。

上述任一所述试剂盒中，所述包被原为如下络合物：螯合剂与载体蛋白通过共价键连接形成的偶联物再与金属离子Ⅰ通过配位键连接形成的络合物；所述金属离子Ⅰ为除了所述待检重金属外的其余金属中的任一种，且所述金属离子Ⅰ与所述抗待检重金属的抗体的亲和力小于所述待检重金属与所述抗待检重金属的抗体的亲和力；

所述共价键是所述螯合剂上的氨基基团与所述载体蛋白上的酚基基团形成的；所述配位键是所述金属离子Ⅰ与所述偶联物中的螯合剂上的乙二胺四乙酸形成的。

上述任一所述试剂盒中，所述包被原是按照如下方法制备得到的：

(1)将螯合剂重氮化，得到重氮化的螯合剂；

(2)将载体蛋白与所述重氮化的螯合剂混合，进行偶联反应，得到载体蛋白与所述重氮化的螯合剂的偶联物；

(3)将所述金属离子Ⅰ的溶液与所述偶联物混合，进行络合反应，得到所述包被原；

上述任一所述试剂盒中，所述重氮化的方法包括如下步骤：将所述螯合剂溶于酸的水溶液中，再向其中加入亚硝酸盐，进行重氮化反应，得到所述重氮化的螯合剂；所述重氮化反应的条件包括：温度为0-5℃、避光和时间为15min；所述温度优选为0℃或4℃；所述螯合剂、酸和亚硝酸盐的配比为4mg∶2×10^-3mol∶1.2×10^-4mol；

上述任一所述试剂盒中，所述偶联反应的条件包括：温度为4℃-10℃或4℃，pH值为8.5-9.0或8.5，反应时间为4h-24h或4h；所述重氮化的螯合剂与所述载体蛋白的投料摩尔比为10∶1；

上述任一所述试剂盒中，所述络合反应的条件包括：温度为25℃、pH值为7.5和时间为12h；所述偶联物与所述金属离子Ⅰ的投料摩尔比为1∶20。

上述任一所述试剂盒中，所述试剂盒中包括包被缓冲液、洗涤液、样品稀释液、标准品溶液和酶标抗抗体；

上述任一所述试剂盒中，所述标准品为EDTA与所述待检重金属的螯合物。

上述任一所述试剂盒中，所述标准品是按照如下方法制备得到的：

(1)将每29.3mg EDTA溶解于去离子水中，调节pH至8.0，得到溶液Ⅰ；

(2)将13.5mg待检重金属可溶性盐溶解于去离子水中，并逐滴加入到所述溶液Ⅰ中，磁力搅拌反应12小时，再将溶液定容至6.4mL，得到EDTA与待检重金属的螯合物。

上述任一所述试剂盒中，所述标准品溶液中待检重金属离子浓度为20ng/mL、10ng/mL、5ng/mL、2.5ng/mL、1.25ng/mL、0.625ng/mL、0.31ng/mL、0.156ng/mL和0.078ng/mL。

上述任一所述试剂盒中，所述包被缓冲液为0.05M、pH9.6的碳酸盐缓冲液；

上述任一所述试剂盒中，每1升洗涤液按照如下方法配制：将8.0g NaCl、0.2gKH₂PO₄、2.96g Na₂HPO₄·12H₂O、1mLTween-20溶于水中，并用水补足至1L；

上述任一所述试剂盒中，样品稀释液按照如下方法配制：将1mL吐温20和1g明胶溶于1L PBS缓冲液中，得到样品稀释液；