[发明专利]一种检测样品中是否含有重金属铜离子的方法及其专用试剂盒

权利要求书

1.一种用于检测样品中是否含有重金属的试剂盒，包括包被原、抗待检重金属的抗体；所述包被原与抗待检重金属的抗体结合，且所述包被原与所述抗待检重金属的抗体的亲和力小于所述待检重金属与所述抗待检重金属的抗体的亲和力。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述包被原为如下络合物：螯合剂与载体蛋白通过共价键连接形成的偶联物再与金属离子Ⅰ通过配位键连接形成的络合物；所述金属离子Ⅰ为除了所述待检重金属外的其余金属中的任一种，且所述金属离子Ⅰ与所述抗待检重金属的抗体的亲和力小于所述待检重金属与所述抗待检重金属的抗体的亲和力。

3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于：所述包被原是按照包括如下步骤的方法制备得到的：

(1)将螯合剂重氮化，得到重氮化的螯合剂；

(2)将载体蛋白与所述重氮化的螯合剂混合，进行偶联反应，得到载体蛋白与所述重氮化的螯合剂的偶联物；

(3)将所述金属离子Ⅰ的溶液与所述偶联物混合，进行络合反应，得到所述包被原；

所述重氮化的方法包括如下步骤：将所述螯合剂溶于酸的水溶液中，再向其中加入亚硝酸盐，进行重氮化反应，得到所述重氮化的螯合剂；所述重氮化反应的条件包括：温度为0-5℃、避光和时间为15min；所述温度优选为0℃或4℃；所述螯合剂、酸和亚硝酸盐的配比为4mg∶2×10^-3mol∶1.2×10^-4mol；

所述偶联反应的条件包括：温度为4℃-10℃或4℃，pH值为8.5-9.0或8.5，反应时间为4h-24h或4h；所述重氮化的螯合剂与所述载体蛋白的投料摩尔比为10∶1；

所述络合反应的条件包括：温度为25℃、pH值为7.5和时间为12h；所述偶联物与所述金属离子Ⅰ的投料摩尔比为1∶20。

4.根据权利要求1-3中任一所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒中包括包被缓冲液、洗涤液、样品稀释液、标准品溶液和酶标抗抗体；

所述标准品为EDTA与所述待检重金属的螯合物。

5.根据权利要求1-4中任一所述的试剂盒，其特征在于：所述标准品是按照如下方法制备得到的：

(1)将每29.3mg EDTA溶解于去离子水中，调节pH至8.0，得到溶液Ⅰ；

(2)将13.5mg待检重金属可溶性盐溶解于去离子水中，并逐滴加入到所述溶液Ⅰ中，磁力搅拌反应12小时，再将溶液定容至6.4mL，得到EDTA与待检重金属的螯合物。

6.根据权利要求1-5中任一所述的试剂盒，其特征在于：所述标准品溶液中待检重金属离子浓度为20ng/mL、10ng/mL、5ng/mL、2.5ng/mL、1.25ng/mL、0.625ng/mL、0.31ng/mL、0.156ng/mL和0.078ng/mL。

7.根据权利要求1-6中任一所述的试剂盒，其特征在于：所述包被缓冲液为0.05M、pH9.6的碳酸盐缓冲液；

每1升洗涤液按照如下方法配制：将8.0g NaCl、0.2g KH₂PO₄、2.96g Na₂HPO₄·12H₂O、1mLTween-20溶于水中，并用水补足至1L；

样品稀释液按照如下方法配制：将1mL吐温20和1g明胶溶于1L PBS缓冲液中，得到样品稀释液；

所述抗待检重金属的抗体为抗待检重金属的单克隆抗体或多克隆抗体；

所述载体蛋白为牛血清白蛋白、人血清白蛋白、血蓝蛋白或卵清白蛋白；

所述酶标抗抗体为辣根过氧化物酶标记的羊抗小鼠抗体。

8.根据权利要求1-7中任一所述的试剂盒，其特征在于：所述待检重金属为铜，所述包被原中的金属为钴，所述标准品中的金属为铜，所述抗铜的单克隆抗体为由保藏编号为CGMCC No.3987的杂交瘤细胞株Cu-EDTA 6A9分泌得到的，所述螯合剂为对氨基苄基乙二胺四乙酸。

9.一种检测样品中是否含有重金属的方法，是用权利要求1-8中任一所述试剂盒对待测样品进行检测。

10.保藏号为CGMCC No.3987的杂交瘤细胞株Cu-EDTA 6A9产生的抗金属铜的单克隆抗体；

保藏号为CGMCC No.3987的杂交瘤细胞株Cu-EDTA 6A9。