[发明专利]羟丙基-β-环糊精的质量控制方法

说明书

技术领域

本发明涉及利用高效液相色谱法对羟丙基-β-环糊精进行质量控制的方法，即测定杂质β-环糊精、1，2-丙二醇、及1，2-丙二醇聚合物的方法。 

背景技术

羟丙基-β-环糊精(HP-β-CD)是目前备受瞩目的β-环糊精(β-CD)衍生物之一，其水溶性高、肾毒性低，不参与生物体内代谢，也不蓄积，基本上没有溶血性和刺激性。HP-β-CD可以增加难溶性药物的水溶性、增加药物稳定性和生物利用度、促进药物释放、降低药物毒副作用等。在药物研究领域具有广泛应用。 

对于HP-β-CD，目前广泛采用的合成方法是利用β-CD与环氧丙烷反应，产物中的杂质主要是残留的β-CD和副产物1，2-丙二醇。 

欧洲药典第6版第1版增补版(EP6.1)和美国药典/国家处方集(USP32-NF27)记载的HP-β-CD的质量控制方法，采用长度300mm，直径3.9mm的苯基硅烷键合硅胶柱，流动相为水，示差折光检测器检测。该色谱柱作为一种专用色谱柱，价格昂贵，售价约为5500元。在35℃条件下以纯水作流动相，在1.5mL/min的流速下，色谱柱的柱效降低较快。柱效过低则无法实现对各组分的有效分离和检测，造成色谱柱寿命缩短，检测成本 升高。 

马学琴等对欧洲药典的方法进行了改进，采用普通的苯基柱(长度250mm，直径4.6mm)，以甲醇-水(1∶10)作流动相，示差折光检测器(马学琴等，羟丙基-β-环糊精的杂质检测，中国医药工业杂志，2006，37(1)：36-38)。由该文献第37页的图1可以看到，β-CD与1，2-丙二醇的色谱峰的峰型对称性较差，1，2-丙二醇与前面杂质峰不能达到有效分离，且不能同时检测β-CD与1，2-丙二醇之间的未知杂质。 

上述两种色谱方法，检测了HP-β-CD中的两种主要杂质，而在经过合成得到的HP-β-CD中，还含有其他杂质，EP6.1和马学琴的方法均未明确其是何物质，EP6.1仅仅是将总杂质的含量限定为1.0％。 

药物中杂质的存在会影响药品稳定性，增加毒副作用，对人体健康产生不利影响。对于广泛应用于制药领域的HP-β-CD，对未知杂质的定性有利于更好的控制HP-β-CD的质量，从而保证在其应用于药品中后获得更加安全有效的产品。 

发明内容

本发明的目的是提供一种简便快捷、专属性好、灵敏度高的HP-β-CD的质量控制方法。 

采用苯基硅烷键合硅胶色谱柱，以乙腈/水为流动相，检测器为示差折光检测器或蒸发光散射检测器。当采用示差折光检测器时(称为方法一)，可以同时检测3种杂质：β-CD、1，2-丙二醇和1，2-丙二醇聚合物，实现了3种杂质与HP-β-CD的有效分离和杂质的同时定量检测。现有技术没有 关于1，2-丙二醇聚合物检测方法的任何报道；采用蒸发光散射检测器时(称为方法二)，可以检测β-CD。 

方法一： 

HP-β-CD的质量控制方法，利用高效液相色谱法测定HP-β-CD中β-CD、1，2-丙二醇、及1，2-丙二醇聚合物的含量，它包括： 

(1)、色谱条件与系统适用性试验：用苯基硅烷键合硅胶为填充剂(4.6×150-250mm)；流动相乙腈-水体积比0-20∶100-80，不包括0∶100，优选为2-7∶98-93，更好为4∶96；示差折光检测器； 

(2)、对照品溶液的制备：精密称取β-CD和1，2-丙二醇对照品，配成二者浓度分别在0.06-1.5和0.08-2.5mg/mL的对照品溶液，二者浓度优选为0.1-1.5mg/mL和0.1-2.5mg/mL，更好的浓度分别为0.3mg/mL和0.5mg/mL； 

(3)、供试品溶液的制备：精密称取HP-β-CD，配成浓度为10-300mg/mL的供试品溶液，优选为50-200mg/mL，更好为100mg/mL； 

(4)、测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各2-100μL，优选为5-50μL，更好为各20μL，注入液相色谱仪，测定，按外标法以峰面积计算β-CD、1，2-丙二醇、及1，2-丙二醇聚合物的含量。 

柱温：20-40℃； 

流速：0.5-2.0mL/min； 

各杂质的定性：分别配置β-CD对照品溶液和1，2-丙二醇对照品溶液，用来确定样品溶液中杂质β-CD和1，2-丙二醇的色谱峰的位置，分别见附图1-3。在β-CD和1，2-丙二醇的峰之间还存在其他未知杂质峰。采用以下 两种方法对未知杂质进行了定性：