[发明专利]以凹土为载体的益生菌制剂的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及益生菌制剂的制备方法，具体涉及一种以凹土为载体的益生菌制剂的制备方法。

背景技术

益生菌又称为益生素、利生菌、活菌剂或微生态制剂。是指能促进肠道内菌群平衡、对宿主起到有益作用的活菌制剂及其代谢产物，临床上，益生菌制剂主要用于预防和治疗各种胃肠道疾病，也可用于肝病的辅助治疗，为肝细胞的再生和修复创造良好的内环境。

益生菌包括双歧杆菌、嗜热链球菌、嗜酸乳杆菌、保加利亚乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、枯草芽孢杆菌、粪链球菌、肠球菌、明串珠菌、片球菌、蜡样芽胞杆菌和地衣芽胞杆菌等。

益生菌的研究与运用，在日本、法国、美国、德国、俄罗斯等十多个国家研究较为专业化和系统性。目前国际上对乳酸菌等益生菌的研究显得非常活跃，产品消费成绩惊人，据粗略估计，全球的年产品生产总值约为300亿美元左右，其中使用益生菌生产的乳制品总产值超过50亿美元，且增长指数在逐年上升，呈上升发展态势。如日本利用益生菌制作的乳制品已成功打入了国际奶品饮料市场，已在13个国家建造了18家加工厂，目前全球每天至少2500万人在饮用这种产品。

凹土又称凹凸棒石粘土、凹凸棒土等，是以凹凸棒石(Attapulgite)为主要成分的一种粘土矿物，主要成分为坡缕石(Palygorskite)或坡缟石，是一种富镁硅酸盐，属于2∶1型层链状晶体结构，由于其本身独特的微观结构和性质，赋予凹土许多优良性能，如吸附性、胶体性、粘结性、催化性等，因而被广泛应用于化工、建材、医药、农业和环境保护等领域。但至今未见到利用凹土作为益生菌载体的报道。

发明内容

本发明的目的在于：提供一种以凹土为载体的益生菌制剂的制备方法，利用凹土吸附益生菌制备活菌制剂，提高益生菌到达肠道的存活率，并大大延长活菌的存活时间。

本发明的技术解决方案是：首先是纯化凹土，然后将益生菌菌悬液在一定的条件下吸附至凹土表面，最后真空冷冻干燥制备成益生菌制剂。

本发明的制备方法包括以下具体步骤：

第一步，凹土的纯化：将凹土采用电导率低于5μs/cm的去离子水浸泡20～28h，凹土与去离子水的质量比为10～20∶1，搅拌器以1000～1500rpm转速再搅拌20～28h，静置分层，取中间层凹土悬液，以凹土悬液质量的5～20％的量继续加入上述去离子水，搅拌、分层同样操作重复2～3次，于105～120℃烘干，研磨，过筛，取200目至140目凹土细粉备用；

第二步，益生菌菌悬液的制备：将双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌、保加利亚乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、粪链球菌或地衣芽胞杆菌由常规手段培养至对数生长期后期，收集菌体，采用无菌生理盐水洗涤去培养基，并用无菌生理盐水将菌体浓度调节至10⁹～10¹⁰CFU/ml备用；

第三步，凹土吸附益生菌：10L益生菌菌悬液添加100～1000g凹土细粉构成吸附体系，调节吸附体系pH3～6、温度20～35℃，吸附20～50分钟，吸附时采用震荡法增加凹土与益生菌的接触，震荡速度为90～180rpm；

第四步，真空冷冻干燥：步骤三的吸附体系于-40～-75℃预冻2～3小时，再迅速移入冷冻干燥机冷冻干燥20～28小时，得益生菌制剂，制剂含水量≤2％，检测活菌剂中活菌数为10⁹～10¹¹CFU/g。

其中，双歧杆菌培养条件：

培养基：蛋白胨15g，葡萄糖15g，酵母膏4g，牛肉膏4g，NaCl 5g，Na₂HPO₄2.5g，蒸馏水1000ml，pH7；35℃静置培养22小时。

其中，嗜酸乳杆菌培养条件：

培养基：蛋白胨10g，牛肉膏10g，酵母膏5g，柠檬酸氢二铵2g，葡萄糖20g，吐温-801ml，CH₃COONa·3H₂O 5g，K₂HPO₄·3H₂O 2g，MgSO₄·7H₂O 0.58g，MnSO₄·H₂O 0.25g，蒸馏水1000ml，调pH6.2-6.4；37℃静置培养20小时。

其中，嗜热链球菌培养条件：培养基同嗜酸乳杆菌；40℃静置培养20小时。

其中，保加利亚乳杆菌培养条件：培养基同嗜酸乳杆菌；37℃静置培养20小时。