[发明专利]以凹土为载体的益生菌制剂的制备方法

权利要求书

1.以凹土为载体的益生菌制剂的制备方法，首先是纯化凹土，然后将益生菌菌悬液在一定的条件下吸附至凹土表面，最后真空冷冻干燥制备成益生菌制剂；其特征在于该制备方法包括以下具体步骤：

第一步，凹土的纯化：将凹土采用电导率低于5μs/cm的去离子水浸泡20～28h，凹土与去离子水的质量比为10～20：1，搅拌器以1000～1500rpm转速再搅拌20～28h，静置分层，取中间层凹土悬液，以凹土悬液质量的5～20％的量继续加入上述去离子水，搅拌、分层同样操作重复2～3次，于105～120℃烘干，研磨，过筛，取200目至140目凹土细粉备用；

第二步，益生菌菌悬液的制备：将双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌、保加利亚乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、粪链球菌或地衣芽胞杆菌由常规手段培养至对数生长期后期，收集菌体，采用无菌生理盐水洗涤去培养基，并用无菌生理盐水将菌体浓度调节至10⁹～10¹⁰CFU/ml备用；

第三步，凹土吸附益生菌：10L益生菌菌悬液添加100～1000g凹土细粉构成吸附体系，调节吸附体系pH3～6、温度20～35℃，吸附20～50分钟，吸附时采用震荡法增加凹土与益生菌的接触，震荡速度为90～180rpm；

第四步，真空冷冻干燥：步骤三的吸附体系于-40～-75℃预冻2～3小时，再迅速移入冷冻干燥机冷冻干燥20～28小时，得益生菌制剂，制剂含水量≤2％，检测活菌剂中活菌数为10⁹～10¹¹CFU/g。

2.根据权利要求1所述的以凹土为载体的益生菌制剂的制备方法，其特征在于：其中，双歧杆菌培养条件：培养基：蛋白胨15g，葡萄糖15g，酵母膏4g，牛肉膏4g，NaCl5g，Na₂HPO₄2.5g，蒸馏水1000ml，pH7；35℃静置培养22小时。

3.根据权利要求1所述的以凹土为载体的益生菌制剂的制备方法，其特征在于：其中，嗜酸乳杆菌培养条件：培养基：蛋白胨10g，牛肉膏10g，酵母膏5g，柠檬酸氢二铵2g，葡萄糖20g，吐温-801ml，CH₃COONa·3H₂O 5g，K₂HPO₄·3H₂O 2g，MgSO₄·7H₂O 0.58g，MnSO₄·H₂O 0.25g，蒸馏水1000ml，调pH6.2-6.4；37℃静置培养20小时。

4.根据权利要求1或3所述的以凹土为载体的益生菌制剂的制备方法，其特征在于：其中，嗜热链球菌培养条件：培养基同嗜酸乳杆菌；40℃静置培养20小时。

5.根据权利要求1或3所述的以凹土为载体的益生菌制剂的制备方法，其特征在于：其中，保加利亚乳杆菌培养条件：培养基同嗜酸乳杆菌；37℃静置培养20小时。

6.根据权利要求1或3所述的以凹土为载体的益生菌制剂的制备方法，其特征在于：其中，鼠李糖乳杆菌培养条件：培养基同嗜酸乳杆菌。37℃静置培养20小时。

7.根据权利要求1所述的以凹土为载体的益生菌制剂的制备方法，其特征在于：其中，粪链球菌培养条件：培养基：蛋白胨2g，牛肉膏2g，乳糖2g，蒸馏水1000ml，pH6.8；37℃振荡培养6h，摇床转速为100rpm。

8.根据权利要求1所述的以凹土为载体的益生菌制剂的制备方法，其特征在于：其中，地衣芽胞杆菌培养条件：培养基：葡萄糖5g，蛋白胨5g，K₂HPO₄2g，MgSO₄2g，蒸馏水1000ml，pH 7.0；37℃振荡培养40h，摇床转速为180rpm。