[发明专利]非组织培养的玉米遗传转化方法有效
| 申请号： | 201010246875.1 | 申请日： | 2010-08-06 |
| 公开（公告）号： | CN102051377A | 公开（公告）日： | 2011-05-11 |
| 发明（设计）人： | 邸宏;王振华;刘昭军;周羽 | 申请（专利权）人： | 东北农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82;A01H5/00 |
| 代理公司： | 哈尔滨东方专利事务所 23118 | 代理人： | 陈晓光 |
| 地址： | 150030 黑龙江*** | 国省代码： | 黑龙江;23 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 组织培养 玉米 遗传 转化 方法 | ||
1.一种非组织培养的玉米遗传转化方法，其特征是：该方法包括如下步骤：
(1)剥取玉米幼胚；
(2)制备农杆菌菌液；
(3)侵染与共培养：将步骤(1)中得到的玉米幼胚浸泡于步骤(2)中制备好的农杆菌菌液中，100-150W超声波处理20min后，接种于Murashige和Skoog固体培养基，24℃条件下暗培养共培养3d；
(4)转基因植株生长：将步骤(3)培养的玉米幼胚用无菌水清洗2-3次，接种于含头孢霉素150mg/L的Murashige和Skoog固体培养基，26℃条件下暗培养1周，移栽到营养基质中，在温室中培育；
(5)转基因植株的检测：采用PCR或Southern杂交鉴别玉米转基因植株。
2.根据权利要求1所述的非组织培养的玉米遗传转化方法，其特征是：步骤(1)所述的剥取玉米幼胚的方法是：取授粉11-13d的玉米幼穗，用75％酒精浸泡1min，0.1％HgCl2水溶液消毒10min，无菌水冲洗5次后，剥取幼胚，幼胚长2～3mm。
3.根据权利要求1或2所述的非组织培养的玉米遗传转化方法，其特征是：步骤(2)所述的制备农杆菌菌液的方法是，取农杆菌100μL接种于5ml含50mg/L卡那霉素、50mg/L利福平和50mg/L链霉素的Yeast Extract Peptone液体培养基中，28℃下160rpm/min振荡培养过夜，取100μl该培养液接种于100ml同样的Yeast Extract Peptone液体培养基中，振荡培养14-18h后，将达到对数生长期的菌液置于离心管，4000rpm离心5min，弃去上清，重悬于含100uM乙酰丁香酮的Murashige和Skoog液体培养基，稀释至OD值0.6。
4.根据权利要求1或2所述的非组织培养的玉米遗传转化方法，其特征是：步骤(4)中所述的营养基质是指蛭石∶草炭土∶消毒田园土＝1∶1∶1，加入磷酸二铵2kg/m3。
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