[发明专利]三碘甲状腺原氨酸定量检测试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及体外免疫检测，尤其是涉及一种三碘甲状腺原氨酸定量检测试剂盒，本发明还涉及该试剂盒的制备方法。

背景技术

三碘甲状腺原氨酸(3，5，3’-三碘甲状腺原氨酸，T3)是一种分子量为651的碘化酪氨酸，与甲状腺素(T4)一样是一种重要的甲状腺激素。碘和酪氨酸是合成甲状腺激素的主要原料，甲状腺球蛋白是碘化的场所和原料，酪氨酸的碘化和碘化酪氨酸的偶联均在此进行，水解甲状腺球蛋白时T3、T4被分泌入血，分泌物中90％为T4，10％为T3。血液中20％的T3由甲状腺直接合成，另外80％的T3是由T4脱去1分子碘生成，脱碘位置不同也可形成反T3，但反T3没有生物活性。T3的半衰期为1.5天，20％在外周组织代谢消除，80％经脱碘代谢。

血清中T3的量只约为T4的1/60，但其生物活性比T4大5倍，因此T3的测定对诊断甲状腺功能紊乱和监测甲状腺技能非常有意义。对甲状腺功能亢进的病人来讲，大多数患者的总T3和总T4的水平都是升高的。不过在某些病例中，甲状腺功能亢进仅仅是由于T3的增多引起的(T3型甲亢症)，因此对fT4正常的甲亢患者，建议检测T3，尤其对于fT4和TSH均正常的患者(一般患者常首先检测fT4和TSH)，更应进一步检测T3。T3水平升高而T4正常还可见于甲状腺功能正常而患有功能自主性甲状腺疾病(Graves眼病)的患者，也可为亚临床型甲状腺功能衰退者的一种代偿现象，同时伴有TSH分泌增多。

大量的实验资料表明，测定血清T3是判断甲状腺功能亢进首选指标之一，特别是T3毒血症患者，血清T4浓度正常，而T3却明显升高。因此，测定血清T3是临床诊断甲状腺功能的一项重要指标。一般来讲，甲亢病人血清T3值会明显升高。在多数甲亢病例中，血清T3的升高和血清T4升高相平行；而T3毒症，亦称T3性甲亢中，血清T4值在正常范围，而仅T3升高。临床上常见到某些病人在发展成典型的甲状腺毒症前，先经过一个血清T3水平升高阶段，说明测定血清T3对于诊断甲亢较测定血清T4更有意义。此外在甲亢病人进行放射性碘或药物治疗过程中，血清T4降至正常，而血清T3仍高于正常，直至临床甲状腺功能恢复正常，血清T3方降至正常水平；故测定血清T3又可作为判断疗效的可靠指标。

从检测原理上来讲，目前临床上常用的检测三碘甲状腺原氨酸的方法主要是竞争法，包括标记抗原(包被抗体)的检测方法和标记抗体(包被抗原)的检测方法两种，国外试剂多为标记抗原的方法，国内试剂多为标记抗体的方法。

从检测技术上来讲，过去以放免为代表的早期T3、T4测定试剂盒受方法学的限制，其灵敏度和抗干扰能力严重不足，存在很大的弊端，已基本上退出市场，目前应用较多的为酶联免疫技术和化学发光技术。化学发光技术兴起于上个世纪80年代是继酶联免疫技术和放免技术之后发展起来的新兴技术，由于其高灵敏度、高特异性，同时方法简便、快速，标记结合物稳定，无放射性同位素损伤和污染等特点，在近些年得到了飞速发展。免疫磁微粒技术是近几年新兴技术，它是利用高分子合成一定粒度大小的磁性固相微粒做载体，载体表面修饰有一定数量的化学功能团，可通过化学偶联等方法包被上具有特异性亲和力的免疫活性物质(抗原或抗体)，具有分离速度快、效率高、可重复性好、反应均相等诸多优点。

发明内容

本发明的目的在于提供一种三碘甲状腺原氨酸定量检测试剂盒，该试剂盒将酶促化学发光技术与磁分离技术相结合，成本低廉，简便快速，结果准确；本发明的另一目的还在于提供该试剂盒的制备方法。

为实现上述目的，本发明可采取下述技术方案：

本发明所述的三碘甲状腺原氨酸定量检测试剂盒，包括包被有二碘甲状腺原氨酸-明胶的磁微粒混悬液、三碘甲状腺原氨酸系列校准品、辣根过氧化物酶标记的三碘甲状腺原氨酸抗体、解离剂、发光底物A液、发光底物B液及浓缩洗液。

所述包被有二碘甲状腺原氨酸-明胶的磁微粒混悬液中，所采用的磁微粒粒径为0.8-1.5um，表面含有浓度为20-30ueq/g的羧基活性基团。

所述三碘甲状腺原氨酸系列校准品采用去激素血清为基质，加入三碘甲状腺原氨酸纯品配制而成。

所述辣根过氧化物酶标记的三碘甲状腺原氨酸抗体，是将辣根过氧化物酶与鼠抗三碘甲状腺原氨酸单克隆抗体相连接。

所述解离剂为含有1-苯胺基-8-萘磺酸(ANS)的Tris-NaCl缓冲液(三(羟甲基)氨基甲烷-盐酸缓冲液)。

所述发光底物A液由酶促化学发光底物、增强剂和氨基酸组成；发光底物B液由氨基酸氧化酶和稳定剂组成。