[发明专利]三碘甲状腺原氨酸定量检测试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.一种三碘甲状腺原氨酸定量检测试剂盒，其特征在于：它包括包被有二碘甲状腺原氨酸--明胶的磁微粒混悬液、三碘甲状腺原氨酸系列校准品、辣根过氧化物酶标记的三碘甲状腺原氨酸抗体、解离剂、发光底物A液、发光底物B液及浓缩洗液。

2.根据权利要求1所述的三碘甲状腺原氨酸定量检测试剂盒，其特征在于：所述包被有二碘甲状腺原氨酸--明胶的磁微粒混悬液中，所采用的磁微粒粒径为0.8-1.5um，表面含有浓度为20-30ueq/g的羧基活性基团。

3.根据权利要求1所述的三碘甲状腺原氨酸定量检测试剂盒，其特征在于：所述三碘甲状腺原氨酸系列校准品采用去激素血清为基质，加入三碘甲状腺原氨酸纯品配制而成。

4.根据权利要求1所述的三碘甲状腺原氨酸定量检测试剂盒，其特征在于：所述辣根过氧化物酶标记的三碘甲状腺原氨酸抗体，是将辣根过氧化物酶与鼠抗三碘甲状腺原氨酸单克隆抗体相连接。

5.根据权利要求1所述的三碘甲状腺原氨酸定量检测试剂盒，其特征在于：所述解离剂为含有1-苯胺基-8-萘磺酸的Tris-NaCl缓冲液。

6.根据权利要求1所述的三碘甲状腺原氨酸定量检测试剂盒，其特征在于：所述发光底物A液由酶促化学发光底物、增强剂和氨基酸组成；发光底物B液由氨基酸氧化酶和稳定剂组成。

7.根据权利要求1所述的三碘甲状腺原氨酸定量检测试剂盒，其特征在于：所述浓缩洗液为含有稳定剂和表面活性剂的磷酸盐缓冲液。

8.根据权利要求1所述的三碘甲状腺原氨酸定量检测试剂盒的制备方法，其特征在于：它包括下述步骤：

第一步，包被有二碘甲状腺原氨酸-明胶的磁微粒混悬液的制备

根据使用量取羧基磁微粒，用EDC和NHS在酸性条件下进行活化，活化完成后，加磁场，静置使磁微粒与液体分开，弃去上清，用PH7.6的0.01M的PBS缓冲液洗去多余活化剂；加入适量的二碘甲状腺原氨酸-明胶，使其浓度为0.5ul/mg磁微粒，在弱碱性条件下震荡反应；反应结束后加磁场，静置使磁微粒与液体分开，弃去上清，用含有1％牛血清白蛋白的0.01M的PBS缓冲液进行封闭，封闭结束后，加入封闭液以保存磁微粒，使磁微粒的最终浓度为0.5mg/ml；该磁微粒混悬液置于2-8度保存，以备使用；

第二步，三碘甲状腺原氨酸系列校准品的制备

用含有0.1％-0.2％NaN3和0.15％-0.25％PC300的去激素血清将三碘甲状腺原氨酸纯品配制成标示浓度为0ng/ml、0.5ng/ml、1ng/ml、2.5ng/ml、5ng/ml、10ng/ml的-系列校准品；

第三步，辣根过氧化物酶标记的三碘甲状腺原氨酸抗体的制备

用活化剂1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺将辣根过氧化物酶上的氨基活化，然后加入鼠抗三碘甲状腺原氨酸单克隆抗体，使抗体上的羧基与活化过的氨基缩合为酰胺化合物，透析后既得三碘甲状腺原氨酸酶标抗体；在标记好的溶液中，等比加入甘油-20度保存备用；

第四步，解离剂的配制

取纯化水、Tris、NaCl、Procl in300、解离剂ANS按照下述比例配制成解离剂：纯化水1000ml、Tris 6.05g、NaCl 8.5g、Proclin3002ml、解离剂ANS1-3g；

第五步，发光底物A液和发光底物B液的配制

发光底物A液：取0.2M Tris-Hcl、0.15mM Luminol、0.59mM羟基香豆素、0.59mM没食子酸配制而成；

发光底物B液：取0.2M乙酸-乙酸盐缓冲、0.85mM氨基酸氧化酶、0.008tween20、0.5mM二乙烯三胺五乙酸、0.12mM维生素C配制而成；

第六步，浓缩洗液的配制

取NaH2PO4·2H2O、Na2HPO4·12H2O、NaCl、Tween20、蒸馏水按照下述比例配制而成：NaH2PO4·2H2O 4.6g、Na2HPO4·12H2O 62.32g、NaCl 175.6g、Tween202-10ml、蒸馏水1000ml。