[发明专利]游离三碘甲状腺原氨酸定量检测试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物免疫检测领域，尤其是涉及一种将酶促化学发光技术与磁分离技术相结合的游离三碘甲状腺原氨酸定量检测试剂盒，本发明还涉及该试剂盒的制备方法。

背景技术

人体甲状腺可以分泌有生理活性的甲状腺素(T4)和三碘甲状腺原氨酸(T3)及无生理活性的反T3等。血浆中的T4来自甲状腺，而80-90％的T3和反T3是T4在外周组织经脱去一个碘原子而生成的。血液中的T3和T4，以结合和游离两种形式存在。绝大部分的甲状腺激素(T499.97％，T399.7％)可逆性的结合于血浆蛋白上，游离的甲状腺激素在血中含量甚微，与蛋白结合的激素和微量游离激素处于动态平衡中，而正是这些微量的游离激素才能进入靶组织细胞，与细胞中受体结合，发挥其生物学作用，它还在垂体部分反馈性地调节促甲状腺激素(TSH)的分泌。结合型的甲状腺激素是没有生物学作用的，它对稳定血中游离激素含量起着贮存与缓冲作用。

T3分子量为651，大约25％由甲状腺直接产生，75％由T4在外周组织，主要在肝、肾中经5`-脱碘酶的作用形成，其每日周转率约为75％，甲状腺外循环总量约40μg，循环血中T3的生物半寿期，即T1/2仅1天，在外周血液中，99.6％与甲状腺结合球蛋白(TBG)及白蛋白结合，一般不和甲状腺结合前白蛋(TBPA)结合，但当TBG浓度低时可与TBPA结合。但血浆中的T3和蛋白质的结合能力相对于T4较弱，与TBG的亲和常数仅为T4的1/10。

T3是目前已知生物活性最强的甲状腺激素，其生物活性为T4的3～5倍。外周组织中约有80％的T4经脱碘酶的作用而生成T3。因此，有人提出T3是真正的甲状腺激素，而T4可能是一种前激素。临床上一般将未与TBG等传输蛋白结合的T3称为游离T3，即FT3，只有游离的T3具有代谢活性，而结合的则没有生理活性。

大量的实验资料表明，测定血清T3是判断甲状腺功能亢进首选指标之一，特别是T3毒血症患者的血清T4浓度正常，而T3却明显升高。因此，测定血清T3是临床诊断甲状腺功能的一项重要指标。一般来讲，甲亢病人血清T3值会明显升高。在多数甲亢病例中，血清T3的升高和血清T4升高相平行；而T3毒症，亦称T3性甲亢中，血清T4值在正常范围，而仅T3升高。临床上常见到某些病人在发展成典型的甲状腺毒症前，先经过一个血清T3水平升高阶段，说明测定血清T3对于诊断甲亢较测定血清T4更有意义。此外在甲亢病人进行放射性碘或药物治疗过程中，血清T4降至正常，而血清T3仍高于正常，直至临床甲状腺功能恢复正常，血清T3方降至正常水平；故测定血清T3又可作为判断疗效的可靠指标。

因为T3在血液中的浓度变化快于T4且更明显，所以血液T3水平的测定也可用于应答兴奋和抑制试验中以评价甲状腺机能。一般认为，在甲状腺强兴奋条件下，T3水平是代表甲状腺功能的一项很好的指标。

但某些疾病如肝硬变，蛋白质及热量营养不良时，血清T3可能降低；但只要甲状腺功能正常，血清T4则在正常范围。所以，作为评定甲状腺功能低下的指标，测定血清T3不如T4可靠。

近年来人们发现测定血清中游离甲状腺激素具有更重要的意义。虽然游离T3即FT3在外周血中含量很低，仅占总T3的0.3％，但它可以通过细胞膜进入细胞与受体结合发挥生理效应，因此它是甲状腺激素发生生理效应的真正活性部分，能比较确切地反映甲状腺的功能状态及其它对人体机能的影响。

一般甲亢病人血清FT3值明显升高。在多数甲亢病例中，血清FT3的升高和血清FT4升高相平行。而T3毒症，亦称T3性甲亢中，血清FT4值在正常范围，而仅FT3升高。临床上常见到某些病人在发展成典型的甲状腺毒症前，先经过一个血清FT3水平升高阶段，进而说明测定血清FT3对于诊断甲亢较测定血清FT4更有意义。此外，在甲亢病人进行放射性碘或药物治疗过程中，血清FT4降至正常，而血清FT3仍高于正常，直至临床甲状腺功能恢复正常，血清FT3方降至正常水平。故测定血清FT3又可以作为判断疗效的可靠指标。

从检测原理上来讲，目前临床上常用的检测游离三碘甲状腺原氨酸的方法主要是竞争法。

从检测技术上来讲，过去以放免为代表的早期FT3、FT4测定试剂盒受方法学的限制，其灵敏度和抗干扰能力严重不足，存在很大的弊端，已基本上退出市场，目前应用较多的为酶联免疫技术和化学发光技术。化学发光技术兴起于上个世纪80年代，是继酶联免疫技术和放免技术之后发展起来的新兴技术，由于其高灵敏度、高特异性，同时方法简便、快速，标记结合物稳定，无放射性同位素损伤和污染等特点，在近些年得到了飞速发展。