[发明专利]游离三碘甲状腺原氨酸定量检测试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.一种游离三碘甲状腺原氨酸定量检测试剂盒，其特征在于：它包括包被有二碘甲状腺原氨酸--明胶的磁微粒混悬液、游离三碘甲状腺原氨酸系列校准品、辣根过氧化物酶标记的游离三碘甲状腺原氨酸抗体、发光底物A液、发光底物B液及磷酸盐缓冲液。

2.根据权利要求1所述的游离三碘甲状腺原氨酸定量检测试剂盒，其特征在于：所述包被有二碘甲状腺原氨酸--明胶的磁微粒混悬液中的磁微粒粒径为0.8-1.5um，表面含有浓度为20-30ueq/g的羧基活性基团。

3.根据权利要求1所述的游离三碘甲状腺原氨酸定量检测试剂盒，其特征在于：所述游离三碘甲状腺原氨酸系列校准品采用激素血清为基质，加入三碘甲状腺原氨酸纯品配制而成。

4.根据权利要求1所述的游离三碘甲状腺原氨酸定量检测试剂盒，其特征在于：所述辣根过氧化物酶标记的游离三碘甲状腺原氨酸抗体采用碳二亚胺标记法。

5.根据权利要求1所述的游离三碘甲状腺原氨酸定量检测试剂盒，其特征在于：所述发光底物A液由0.2M Tris-Hcl、0.15mM Luminol、0.59mM羟基香豆素、0.35mM没食子酸组成。

6.根据权利要求1所述的游离三碘甲状腺原氨酸定量检测试剂盒，其特征在于：所述发光底物B液由0.2M乙酸-乙酸盐缓冲液、0.85mM氨基酸氧化酶、0.8％tween 20、0.5mM DTPA、0.12mM维生素C组成。

7.根据权利要求1所述的游离三碘甲状腺原氨酸定量检测试剂盒，其特征在于：所述浓缩洗液为加有稳定剂和表面活性剂的磷酸盐缓冲液。

8.根据权利要求1所述的游离三碘甲状腺原氨酸定量检测试剂盒的制备方法，其特征在于：它包括下述步骤：

第一步，包被有二碘甲状腺原氨酸--明胶的磁微粒混悬液的制备

根据使用量取适量的羧基磁微粒，用过量的EDC和NHS在酸性条件下进行活化，活化时间为30min，然后加磁场，静置，使磁微粒与液体分开，弃去上清，用PH为7.6的0.01M的磷酸盐缓冲液洗去多余的活化剂；加入二碘甲状腺原氨酸--明胶，使其浓度为0.2ul/mg磁微粒，在弱碱性条件下震荡反应1h；反应结束后加磁场，静置使磁微粒与液体分开，弃去上清，用含有1％牛血清白蛋白的0.01M的磷酸盐缓冲液进行封闭；并用封闭液保存磁微粒，得到磁微粒浓度为0.5mg/ml的混悬液；将该磁微粒混悬液置于2-8度保存备用；

第二步，游离三碘甲状腺原氨酸系列校准品的制备

用含有0.05％-0.1％的NaN3和0.15％-0.25％的PC300的去激素血清将三碘甲状腺原氨酸纯品配制成标示浓度为0pmol/l、2pmol/l、5pmol/l、10pmol/l、25pmol/l、50pmol/l的一系列校准品；

第三步，辣根过氧化物酶标记的游离三碘甲状腺原氨酸抗体的制备

采用碳二亚胺标记法：先用活化剂EDC将辣根过氧化物酶上的氨基活化，然后加入鼠抗游离三碘甲状腺原氨酸单克隆抗体，使抗体上的羧基与活化过的氨基缩合为酰胺化合物，透析后既得三碘甲状腺原氨酸酶标抗体；在标记好的溶液中，等比加入甘油-20度保存备用；

第四步，发光底物A液的配制

发光底物A液由0.2M Tris-Hcl、0.15mM Luminol、0.59mM羟基香豆素、0.35mM没食子酸配制而成。

第五步，发光底物B液的配制

发光底物B液由0.2M乙酸-乙酸盐缓冲液、0.85mM氨基酸氧化酶、0.8％tween20、0.5mM DTPA、0.12mM维生素C配制而成。

第六步，浓缩洗液的配制

取NaH2PO4·2H2O，4.06g；Na2HPO4·12H2O，62.32g；NaCl，175.6g；Tween20，2-10ml；蒸馏水，1000ml配制后得到20倍浓缩洗液。