[发明专利]一种酰化支链淀粉修饰卡介菌多糖核酸口服兽用脂质体及其冻干制剂

说明书

技术领域

本发明属于动物药领域，涉及一种酰化支链淀粉修饰口服兽用卡介菌多糖核酸(BCG-PSN)脂质体及其冻干制剂，以及制备方法。

背景技术

使用高分子材料包裹脂质体后可以使得载体更稳定、结构更完整，来提高在其在口服或外周给药后复杂生理环境中的稳定性。支链淀粉从结构上来讲，是一个具有树枝形分支结构的多糖。相对分子质量较大，一般由1000-300,000个左右葡萄糖单位组成，分子量约为100万，有些可达600万。D-吡喃葡萄糖单位通过α-1，4-苷键连接成一直链，此直链上又可通过α-1，6-苷键形成侧链，在侧链上又会出现另一个分支侧链。主链中每隔6-9个葡萄糖残基就有一个分支，每一个支链平均含有约15-18个葡萄糖残基，平均每24-30个葡萄糖残基中就有一个非还原尾基。因此支链淀粉的结构为高支化聚合物，十分复杂。但由于考虑到支链淀粉本身有一定的亲水性，所以要将其结合到脂质体的脂质双分子层中，需要在其结构中加入亲脂性基团。本专利旨在使支链淀粉在催化剂条件下与棕榈酰氯等反应，合成酰化支链淀粉，并用该酰化支链淀粉修饰含有多糖和核酸的脂质体，由于多糖和核酸在胃酸和肠液中暴露会失效，所以考虑将其制备成脂质体，使用脂质体中的磷脂双分子层保护药物，但在实际使用中发现保护效果不佳，不能达到有效给药，所以使用合成的酰化支链淀粉修饰多糖和核酸脂质体，使含多糖和核酸的脂质体口服成为可能，试验取得了很好的实际效果。

以棕榈酰化支链淀粉的合成说明合成方法和取代度测定方法，合成过程如下

取代度的测定：精确称取棕榈酸甲酯用50％乙醇溶液配制为3mg/mL的溶液(相当于棕榈酰基的2.656mg/mL)。取此溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL至试管中，分别补足50％乙醇溶液至1mL，接着分别加入1mL碱性盐酸羟胺溶液，混匀，沸水浴中加热1～2min，取出立即冷却。加稀HCl溶液1mL，加FeCl₃溶液5mL，另取50％乙醇溶液1mL按上法同样操作为试剂空白，在530nm处测定吸收度值，以棕榈酰基计算标准曲线为：A₅₃₀＝0.2555C(mg/mL)+0.0011，相关系数r＝0.9999，将合成样品测得的吸收值带入曲线即可求得取代度。以棕榈酸甲酯为标准，建立了显色后530nm吸光度值与棕榈酰基团质量的对应线性关系，结果线性良好，方法学研究合格，证明此方法可以用来测定样品中棕榈酰基的含量。

卡介苗(Bacillus Calmette Guerin，BCG)是一种弱化的牛型分支杆菌，广泛应用于预防结核病，也是目前预防结核病最为有效的疫苗。BCG的主要成分包括脂类、多糖、蛋白质和核酸，而其中的多糖和核酸组分具有重要的生理功能，如BCG及其相应成分对免疫系统的非特异刺激功能常有助于治疗变态反应性疾病、肿瘤等，因而BCG也显示出临床治疗相关疾病的潜在应用价值。但由于BCG的成分复杂，其引发副作用的几率也比较高。因此，如何分离、纯化BCG，提取其中的有效成分而去除引发副作用的组份将有助于减少其副作用的发生，真正发挥其在其他相关疾病治疗中的效用。