[发明专利]一种酰化支链淀粉修饰卡介菌多糖核酸口服兽用脂质体及其冻干制剂

权利要求书

1.一种酰化支链淀粉修饰的卡介菌多糖核酸口服兽用脂质体，其特征在于该脂质体的配方含有以下重量份的原料：

卡介菌多糖核酸    1份

酰化支链淀粉      1-10份

磷脂              10-50份

胆固醇            1-10份。

2.根据权利要求1所述的卡介菌多糖核酸口服兽用脂质体，其特征在于该脂质体的配方含有以下重量份的原料：

卡介菌多糖核酸    1份

酰化支链淀粉      3-4份

磷脂              20-25份

胆固醇            2-3份。

3.根据权利要求1或2所述的卡介菌多糖核酸脂质体，其特征在于酰化支链淀粉为碳链中碳原子数目从6～20的酰化支链淀粉；优选为正己酸酰化支链淀粉、月桂酸酰化支链淀粉或棕榈酸酰化支链淀粉；磷脂为天然磷脂和/或合成磷脂，其中天然磷脂为卵磷脂或大豆磷脂，合成磷脂为二棕榈酰磷脂酰胆碱。

4.根据权利要求1或2所述的卡介菌多糖核酸脂质体，其特征在于酰化支链淀粉为取代度为0.1-1的酰化支链淀粉。

5.一种酰化支链淀粉修饰的卡介菌多糖核酸口服兽用脂质体冻干制剂，其特征在于在权利要求1或2所述的原料中再加入赋形剂，卡介菌多糖核酸与赋形剂的重量比为1∶30～100，通过冷冻干燥制备成冻干制剂。

6.根据权利要求5所述的卡介菌多糖核酸脂质体冻干制剂，其特征在于赋形剂选自甘露醇、蔗糖、右旋糖甘、山梨醇、葡萄糖和海藻糖中的一种或几种，。

7.权利要求1或2所述的卡介菌多糖核酸脂质体的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

a.酰化支链淀粉修饰前的卡介菌多糖核酸脂质体的制备：采用薄膜分散法、乙醇注入法、逆相蒸发法、乙醚注入法或机械法等常规方法制备脂质体混悬液；

b.制备得到脂质体混悬液后，将脂质体混悬液冲入氮气在室温下缓慢搅拌，将酰化支链淀粉溶液以恒定速度滴入脂质体混悬液中，滴加完毕后在室温下孵化1～3小时，得到混悬液备用；

c.使用pH7～8的磷酸盐缓冲液加入到混悬液中，调节混悬液的pH到7.4，得到酰化支链淀粉修饰卡介菌多糖核酸脂质体；

d.更进一步，可将步骤c得到的酰化支链淀粉修饰卡介菌多糖核酸脂质体进行二次均质和/或挤压，得到所需脂质体；也可以不进行二次均质和/或挤压。

8.根据权利要求7所述的卡介菌多糖核酸脂质体的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

a.酰化支链淀粉修饰前的卡介菌多糖核酸脂质体混悬液的制备：称取处方量的卡介菌多糖核酸、磷脂和胆固醇溶解于适量的90％乙醇溶液中，通入氮气后混合均匀，放入温度30～45℃的水浴中用旋转蒸发仪抽干乙醇，形成均一的磷脂膜，使用pH7.4的磷酸盐缓冲液洗脱磷脂膜；将得到的脂质体混悬液进行均质和/或挤压，得到脂质体混悬液；

b.将得到的脂质体混悬液冲入氮气在室温下缓慢搅拌，将酰化支链淀粉溶液以恒定速度滴入脂质体混悬液中，滴加完毕后在室温下孵化1～3小时，得到混悬液备用；

c.使用pH7～8的磷酸盐缓冲液加入到步骤b所得的混悬液中混合，调节混悬液的pH到7.4左右，得到酰化支链淀粉修饰卡介菌多糖核酸脂质体；

d.更进一步，可将步骤c得到的酰化支链淀粉修饰卡介菌多糖核酸脂质体进行二次均质和/或挤压，得到所需脂质体；也可以不进行二次均质和/或挤压。

9.根据权利要求7或8所述的卡介菌多糖核酸脂质体的制备方法，其特征在于均质采用Niro Soavi Ns1001L均质机，在一级阀1100～1250bar和二级阀200～250bar的压力下均质3～5次；挤压采用200nm的滤膜通过挤出仪挤压出来。

10.权利要求5或6所述的卡介菌多糖核酸脂质体冻干粉的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

称取处方量的赋形剂溶解于适量的水中，混合均匀后，将制备得到的酰化支链淀粉修饰卡介菌多糖核酸脂质体缓慢滴入到溶液中，边滴入边搅拌，得到稳定的混悬液后通过0.2μm的微孔滤膜过滤灭菌后在零下70℃下放置一天，然后放入冻干机中进行冻干，冻干完毕后冲入氮气封口。