[发明专利]土壤中土霉素残留量的高效液相色谱检测方法

说明书

技术领域

本发明属于化学物质残留量检测技术，尤其涉及土壤中土霉素残留量的高效液相色谱检测方法。

背景技术

近年来，随着集约化畜牧业以及配合饲料工业的发展，四环素类、大环内酯类、青霉素类、氨基糖类和磺胺/甲氧苄氨嘧啶类抗生素作为饲料添加剂越来越被广泛地应用于畜禽养殖业和水产养殖业中。据统计，欧共体每年养殖业中抗生素的消耗量已达5000多吨；美国每年动物养殖业中抗生素的用量约为11,000多吨，约占抗生素总用量的70％左右；我国抗生素用量约为美国的600倍左右。在所使用的抗生素中，土霉素(Oxytetracycline，OTC)和四环素(Tetracycline)等四环素类抗生素是应用最广泛、使用量最大的一类抗生素。我国畜禽粪便土霉素含量平均为9.09mg/kg。另据报道，我国农村每年畜禽粪便产生量约达40亿吨，80％以上的畜禽粪便没有经过综合处理，而直接被施于农田，经动物粪便排出的各种抗生素及其代谢产物极易进入农田土壤环境中，导致各种抗生素尤其是土霉素等四环素类抗生素在土壤环境中的累积，从而降低土壤生物活性，进而减弱土壤的生物功能。因此，急需建立一种适合于检测土壤中土霉素等四环素类抗生素残留的方法，以探明和摸清我国农田土壤中四环素类抗生素的残留及转化，从而实现我国农产品安全和农业可持续发展。然而，目前关于介质中土霉素等抗生素残留的测定方法大多是基于畜禽蛋肉、乳制品、动物组织、水产品、饲料和蜂胶等介质中四环素类抗生素中的提取及测定建立起来的，如猪肉中四环素类药物残留的测定方法(王立君，赵健，杨挺.固相萃取一高效液相色谱法测定猪肉中四环素类药物的残留[J].现代农业科技，2006(11)：120-121)；肉类及水产品中四环素类抗生素残留量的测定方法(许传梅，星玉秀，董琦，皮立，肖远，胡凤祖.肉类及水产品中四环素类抗生素残留量的高效液相色谱测定方法[J].分析实验室，2007，12(26)：258-260)；饲料中土霉素的测定方法(宋慧敏，耿士伟，冯三令，储瑞武，冯群科，贾书静.高效液相色谱法测定饲料中土霉素[J].中国农业科学与技术，2008，10(S2)：43-47)；畜、禽肉中土霉素残留量的测定方法(修丽华，姜世娟，迟惠，宋永健，郭伟伟，王娟.高效液相色谱法测定畜、禽肉中土霉素的残留量[J].现代食品科技，2007，11(23)：88-90)；鸡肝中土霉素、金霉素、四环素的测定方法(乔坤云.HPLC分析测定鸡肝中土霉素、金霉素、四环素方法[J].中国卫生检验杂志，2003，10(13)：610-611)；简单流动相测定土霉素含量的方法(徐春明，郑广军.简单流动相测定土霉素的含量[J].工程科学，2008，01(10)：25-30)；鸡肉中5种四环素类药物残留量的测定方法(余永新，王静，曹维强.RP-HPLC法快速检测鸡肉中5种四环素类药物残留量[J].毒理学杂志，2007，12(21)：495-497)；城市污水中氯霉素和四环素类抗生素的测定方法(刘虹，张国平，刘丛强.贵阳城市污水及南明河中氯霉素和四环素类抗生素的特征[J].分析化学，2007，35(3)：315-319)；畜牧粪便中13种抗生素药物残留的测定方法(胡献刚，罗义，周启星，徐琳.固相萃取-高效液相色谱法测定畜牧粪便中13种抗生素药物残留[J].分析化学，2008，36(9)：1162～1166)。鲜见关于土壤中四环素类抗生素残留的提取及测定方法的报道。我国土壤种类繁多，其性质和畜禽蛋肉等农产品具有较大的差异，因此，难以将上述介质中土霉素等四环素类抗生素的测定方法直接应用于土壤中。

发明内容

本发明的目的是弥补现有技术中无法快速、准确检测土壤中土霉素的缺陷，提供一种土壤中土霉素提取且测定残留量的方法，以期为探明土霉素在农田土壤中的残留及其转化提供方法依据。

本发明的技术方案为：土壤中土霉素残留量的高效液相色谱检测方法，包括如下步骤：

(1)配制土霉素标准品溶液和提取缓冲液Na₂EDTA-Mcllvaine；

(2)提取土壤样品中的土霉素：在干燥土壤样品中加入提取缓冲液Na₂EDTA-Mcllvaine，混合均匀，提取、离心获得的上清液即为土霉素待测液；

(3)对土霉素待测液进行纯化和洗脱获得洗脱液；

(4)洗脱液干燥后加入流动相，提取过滤得滤液；

(5)用高效液相色谱法测定滤液中的土霉素含量。

土霉素的提取方式为超声提取。

每次超声提取的时间为3-20分钟。最优为8分钟。