[发明专利]一株醋酸钙不动杆菌及其培养方法与应用

说明书

技术领域

本发明涉及一株可降解石油的醋酸钙不动杆菌(Acinetobacter calcoaceticus)WG-6及其培养方法与应用，属于微生物技术领域。

背景技术

我国作为石油生产、消费大国，由于生产条件、环保技术等方面相对落后，石油污染问题相当突出。石油类污染物进入土壤后，由于其特殊的物理和化学性质，导致其残留时间长且难以去除，对土壤环境造成一系列的危害，给污染地区的生态系统、地下水源以及人类健康带来严重的负面影响。

土壤中石油污染的处理方法按其性质可分为3种：物理方法，化学方法和生物方法。其中物理和化学方法存在如下缺陷：消极处理、费用昂贵和二次污染严重。生物方法修复石油污染土壤是指利用特定的生物将土壤中的石油及石油产品转化成为无害的无机化合物

(通常为水和二氧化碳)的过程。由于其费用低、效果好、无二次污染等优点，迅速成为土壤石油污染处理研究的热点。

随着修复技术研究的深入，各种污染土壤的修复装置和微生物菌剂的制作技术被相继报道。中国专利文件公告号CN 2623365Y(申请号03214009.6)公开了一种污染土壤生物修复设施，中国专利文件公开号CN 101234392A(申请号200810014714.2)公开了一种高浓度石油污染土壤的生物修复装置和方法，这些修复方法都属于异位修复方法，适用于污染严重的土壤，投资成本高，对于污染程度轻微、面积大的土壤不适合。中国专利文件公开号CN 1785539A(申请号200510130674.4)公开了一种石油污染土壤的原位生物修复方法，该方法是添加真菌-细菌液态混合微生物制剂，添加土壤结构改良剂、有机肥和无机营养盐，采用灌溉、翻耕、覆盖多孔地膜和保水保温的工程设施完成石油污染土壤的原位修复过程。中国专利文件公开号CN 1990854A(申请号200510130900.9)公开了一种处理稠油污水的微生物菌剂及制备方法，该菌剂包含了铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、弗氏丙酸杆菌、液化金杆菌、环状芽孢杆菌、短小杆菌、球形节杆菌、木棍杆菌、热土厌氧棒菌，由不同菌株的协同作用，可以加快稠油污水的生物处理。这些微生物菌剂的生产大多是通过微生物液态发酵培养后直接使用或是与固态微生物载体吸附后使用，菌剂中的石油降解菌仅仅来自液态发酵液，活菌数目有限，并且菌体本身降解石油速度较慢，菌剂生产成本较高。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供一株可降解石油的醋酸钙不动杆菌(Acinetobactercalcoaceticus)WG-6及其培养方法与应用。

发明概述

本发明所述醋酸钙不动杆菌能够直接将石油污染物分解并作为营养物质加以利用，同时进行生长繁殖，石油降解效果明显；本发明还提供由该醋酸钙不动杆菌及其他成分混合制备的高密度菌剂，该菌剂不仅能快速分解石油，而且菌剂中含有的其他物质能够改善土壤的微生态环境，加快土壤的修复进程。

术语解释

CFU/mL：指的是每毫升样品中含有的微生物群落总数。

CFU/g：指的是每克样品中含有的微生物群落总数。

发明详述

醋酸钙不动杆菌(Acinetobacter calcoaceticus)WG-6，该菌株2010年6月11日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏号：CGMCC No.3915。

上述醋酸钙不动杆菌(Acinetobacter calcoaceticus)WG-6分离自我国胜利油田的石油污染土壤，菌种保藏号为CGMCC No.3915，微生物株名为WG-6，不动杆菌属，革兰氏阴性菌，粗短，静止时近乎球状，无芽胞及鞭毛，无荚膜，专性需氧，氧化酶试验阴性，接触酶阳性。WG-6的16s rDNA测序结果如SEQ ID NO.1所示。

上述醋酸钙不动杆菌(Acinetobacter calcoaceticus)WG-6的培养方法，步骤如下：

(1)取菌种保藏号为CGMCC No.3915的醋酸钙不动杆菌(Acinetobacter calcoaceticus)WG-6接种于牛肉膏蛋白胨斜面培养基上，活化16～32h，然后，转接到液体LB培养基或液体牛肉膏蛋白胨培养基内，摇瓶活化16～32h，得活化后菌液；

(2)将步骤(1)制得的活化后菌液按体积比2％～10％的比例转接到液态发酵培养基中，摇床培养16～32h，转速为150～250rpm，培养温度为20～30℃，得醋酸钙不动杆菌菌液。