[发明专利]一株醋酸钙不动杆菌及其培养方法与应用

权利要求书

1.一株醋酸钙不动杆菌(Acinetobacter calcoaceticus)WG-6，该菌株2010年6月11日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号：CGMCC No.3915。

2.一种权利要求1所述醋酸钙不动杆菌(Acinetobacter calcoaceticus)WG-6的培养方法，步骤如下：

(1)取菌种保藏号为CGMCC No.3915的醋酸钙不动杆菌接种于牛肉膏蛋白胨斜面培养基上，活化16～32h，然后，转接到液体LB培养基或液体牛肉膏蛋白胨培养基内，摇瓶活化16～32h，得活化后菌液；

(2)将步骤(1)制得的活化后菌液按体积比2％～10％的比例转接到液态发酵培养基中，摇床培养16～32h，转速为150～250rpm，培养温度为20～30℃，得醋酸钙不动杆菌菌液。

3.如权利要求2所述的培养方法，其特征在于，所述步骤(2)醋酸钙不动杆菌菌液中醋酸钙不动杆菌的有效活菌数为10⁷～10⁹CFU/mL。

3、如权利要求2所述的培养方法，其特征在于，所述步骤(2)中每100mL液态发酵培养基含有如下成分：葡萄糖1～3g，豆粕粉为1～2g，酵母粉为0.5～1g，K₂HPO₄ 0.1～0.12g，CaCl₂ 0.005～0.015g，MgSO₄·7H₂O 0.12～0.18g，MnSO₄ 0.005～0.015g。

4.权利要求1所述醋酸钙不动杆菌(Acinetobacter calcoaceticus)WG-6在石油降解方面的应用。

5.权利要求1所述醋酸钙不动杆菌(Acinetobacter calcoaceticus)WG-6制备的高密度菌剂，由如下步骤制得：

(i)取醋酸钙不动杆菌菌液，按重量比5％～10％的比例接种于固态发酵培养基中，混合均匀，调整含水量为30wt％～60wt％，20～30℃温度下培养2～4天，得固态醋酸钙不动杆菌；

(ii)将步骤(i)制得的固态醋酸钙不动杆菌，室温风干至含水量为10wt％～15wt％，即得高密度菌剂。

6.如权利要求5所述的高密度菌剂，其特征在于，所述的固态发酵培养基由麸皮与草炭按重量比0.5～2∶1的比例混合制得。

7.如权利要求5所述的高密度菌剂，其特征在于，所述的高密度菌剂中醋酸钙不动杆菌的有效活菌数为10⁹～10¹¹CFU/g。

8.权利要求5所述高密度菌剂在修复石油污染土壤中的应用，步骤如下：

(1)向含原油1～5wt％的土壤中添加氮磷农用复合肥，调节土壤含量中碳、氮、磷的摩尔比为(100～120)∶(5～10)∶1，加水调节土壤含水量至20～40wt％，疏松土壤，得含油培养土壤；

(2)按质量比1～5％向步骤(1)制得的含油培养土壤中加入高密度菌剂，混合均匀，每隔一周翻土一次，维持土壤含水量20～50wt％，修复一个月即可。

9.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述的氮磷农用复合肥为硝基磷酸铵。