[发明专利]一种红车轴草异黄酮的生产方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种红车轴草异黄酮的生产方法。

背景技术

红车轴草(Trifolium pratense L.)为豆科多年生草本植物，又名红三叶、红花苜蓿和三叶草等。原产于欧洲和西亚，现广泛分布于世界各地，为温带分布植物。我国南北各地均有栽培。野生红车轴草资源丰富。红车轴草中红车轴草异黄酮主要有鹰嘴豆芽素A(biochanin A)、大豆苷元(daidzein)、染料木素(genistein)和芒柄花素(formononetin)，此外还含有柳穿鱼素(pectolinarigenin)、红车轴草素(pratensein)和野靛苷(pseudobaptigenin)等多种异黄酮成分。红车轴草异黄酮具有抗氧化(延缓衰老)、抗癌、抗动脉粥样硬化、抗血栓、降低血脂等一系列的健康作用，特别是对中老年女性发病率较高的雌激素相关肿瘤如乳腺癌、卵巢癌、子宫内膜癌、子宫颈癌的发生和发展具有抑制作用。红车轴草异黄酮因具有植物雌激素样作用和抗癌作用等多种生物学功能而格外受人关注，目前在国外红车轴草已被制成各种剂型，对红车轴草的研究越来越多，也越来越深入。红车轴草的保健食品已进入国际市场，红车轴草植物资源十分丰富，对其活性成分的开发利用，从中研制成具有防治中老年妇女多种疾病的天然保健制剂和药剂，将产生良好的社会效益和经济效益。目前国内市场对红车轴草异黄酮提取物的标准主要有：红车轴草异黄酮3％、8％、15％、20％。检测常用高效液相色谱技术，红车轴草异黄酮通常标定四个成分：大豆甙元(Daidzein)，染料木素(Genistein)，鹰嘴豆芽素A(Biochanin A)和刺芒柄花素(Formononetin)，较高含量的红车轴草红车轴草异黄酮的提取技术要求高，目前国内高含量的红车轴草提取分离工艺不成熟，成为植物化学领域里研究的热点。

发明内容

本发明要解决的问题是提供一种在较低成本下制备红车轴草异黄酮的工艺方法。

本发明一种红车轴草异黄酮的生产方法，其特征在于包含有以下步骤：a.提取：用甲醇提取红车轴草；

b.过滤：提取液在储罐中静止，过滤除渣；

c.脱色浓缩：过活性碳柱脱色，浓缩；用石油醚、乙酸乙酯分别萃取，浓缩得干品；

d.调节ph值：用NaOH水溶液溶解干品，控制ph值为7-9；

e.上柱：用AB-8大孔吸附树脂上柱，用甲醇溶液洗脱蒸干；

f.萃取结晶：用NaOH水溶液溶解干品，用乙酸乙酯分别萃取，浓缩至一定的体积，降温结晶。

本发明一种红车轴草异黄酮的生产方法，其特征在于包含有以下步骤：a.提取：将粉碎后的红车轴草投入提取罐中，加入12-18L/KG的80％的甲醇，在80℃的环境中提取1-4小时，提取4次，合并前三次提取液，其中第四次的提取液用于下一批次提取液。

b.过滤：提取液在储罐中静止3小时，过滤(300目)除渣。

c.脱色浓缩：过活性碳柱脱色，60℃-80℃间进行浓缩，直甲醇全部蒸出后，用石油醚、乙酸乙酯分别萃取3次，浓缩得干品。

d.调节ph值：用NaOH水溶液溶解干品，用水量为1L/KG红车轴草，温度控制在50℃，冷却至室温，控制ph值为7-9。

e.上柱：用AB-8大孔吸附树脂上柱，上柱流速为1.5柱体积/小时，上柱体积为柱体积的40倍，其中后10倍柱体积溶液留下一批重复上柱用，新上柱溶液依次减少5倍体积。用2倍柱体积的水洗脱后，用70％-99％的甲醇洗脱，洗脱速度为1柱体积/小时。

f.萃取结晶：用NaOH水溶液溶解干品，用乙酸乙酯分别萃取3次，合并萃取液，浓缩至一定的体积，在4℃条件下结晶，过滤，用甲醇溶液溶解结晶，再4℃条件下重新结晶，过滤晶体。

本发明一种红车轴草异黄酮的生产方法，通过循环使用提取溶液及柱层析溶液、二次萃取及柱层析等步骤，获得了高纯度的异黄酮产品。该生产方法中循环使用溶剂、脱色柱技术、二次萃取，一方面提高了以鹰嘴豆牙素A为主的异黄酮的纯度；另一方面节约了大量的溶剂、电、热，延长了树脂的使用周期。该工艺提高了产品质量，节约了能耗。

具体实施方式

实施例1、

1、提取  投入10KG粉碎后的红车轴草材料，每次加入80％的甲醇4.5L，浸泡1小时后搅拌并加热至80℃提取3小时。提取4次，合并前三次提取液约118L，其中第四次的提取液约44L用于下一批次的提取液。

2、过滤  将前三次的提取液冷却1小时后真空抽滤(300目滤布)。