[发明专利]一种大肠杆菌胞内表达载体及其应用有效

专利信息
申请号: 201010226274.4 申请日: 2010-07-14
公开(公告)号: CN101984063A 公开(公告)日: 2011-03-09
发明(设计)人: 吴敬;陈晟;吴丹;赵志军;陈坚 申请(专利权)人: 江南大学
主分类号: C12N15/70 分类号: C12N15/70;C12N1/21;C12P13/22;C12R1/19
代理公司: 北京汇信合知识产权代理有限公司 11335 代理人: 王秀丽
地址: 214122 江*** 国省代码: 江苏;32
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摘要:
搜索关键词: 一种 大肠杆菌 表达 载体 及其 应用
【权利要求书】:

1.一种大肠杆菌胞内表达载体,其特征在于核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

2.权利要求1所述的表达载体,其特征在于含有:复制子,抗性标记基因,两个多克隆位点,阻遏蛋白基因及双启动于。

3.如权利要求1或2所述的载体,其特征在于所述抗性标记基因为卡那霉素抗性基因。

4.如权利要求1或2所述的载体,其特征在于所述复制子为p15A。

5.如权利要求1或2所述的载体,其特征在于所述两个多克隆位点分别为CAGCTGAGTACTCATATGGATATCAGATCTGGATCCTCTAGAGTTAACGAGCTCCCATGG

6.如权利要求1或2所述的载体,其特征在于所述阻遏蛋白基因为λcItS857。

7.如权利要求1或2所述的载体,其特征在于所述双启动子λ噬菌体PL、PR双启动子。

8.如权利要求1所述表达载体的应用,其特征在于构建衍生表达载体pSV03,用于色氨酸生产。

9.如权利要求8所述表达载体的应用,其特征在于所述表达载体pSV03含有修饰的外源基因aroF、抗色氨酸反馈调控的trp操纵子基因(trpEFbrDCBA);所述trpEFbrDCBA核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。

10.如权利要求9所述表达载体的应用,其特征在于所述基因aroF通过定点突变技术,缺失突变了由aroF编码的DAHP合成酶氨基酸序列中的第十一个氨基酸Lie,从而获得了抗色氨酸反馈调节的aroFFbr基因,序列如SEQ ID NO:3所示。

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