[发明专利]一种大肠杆菌胞内表达载体及其应用有效
| 申请号: | 201010226274.4 | 申请日: | 2010-07-14 |
| 公开(公告)号: | CN101984063A | 公开(公告)日: | 2011-03-09 |
| 发明(设计)人: | 吴敬;陈晟;吴丹;赵志军;陈坚 | 申请(专利权)人: | 江南大学 |
| 主分类号: | C12N15/70 | 分类号: | C12N15/70;C12N1/21;C12P13/22;C12R1/19 |
| 代理公司: | 北京汇信合知识产权代理有限公司 11335 | 代理人: | 王秀丽 |
| 地址: | 214122 江*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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| 摘要: | |||
| 搜索关键词: | 一种 大肠杆菌 表达 载体 及其 应用 | ||
1.一种大肠杆菌胞内表达载体,其特征在于核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。
2.权利要求1所述的表达载体,其特征在于含有:复制子,抗性标记基因,两个多克隆位点,阻遏蛋白基因及双启动于。
3.如权利要求1或2所述的载体,其特征在于所述抗性标记基因为卡那霉素抗性基因。
4.如权利要求1或2所述的载体,其特征在于所述复制子为p15A。
5.如权利要求1或2所述的载体,其特征在于所述两个多克隆位点分别为CAGCTGAGTACTCATATGGATATCAGATCT和GGATCCTCTAGAGTTAACGAGCTCCCATGG。
6.如权利要求1或2所述的载体,其特征在于所述阻遏蛋白基因为λcItS857。
7.如权利要求1或2所述的载体,其特征在于所述双启动子λ噬菌体PL、PR双启动子。
8.如权利要求1所述表达载体的应用,其特征在于构建衍生表达载体pSV03,用于色氨酸生产。
9.如权利要求8所述表达载体的应用,其特征在于所述表达载体pSV03含有修饰的外源基因aroF、抗色氨酸反馈调控的trp操纵子基因(trpEFbrDCBA);所述trpEFbrDCBA核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。
10.如权利要求9所述表达载体的应用,其特征在于所述基因aroF通过定点突变技术,缺失突变了由aroF编码的DAHP合成酶氨基酸序列中的第十一个氨基酸Lie,从而获得了抗色氨酸反馈调节的aroFFbr基因,序列如SEQ ID NO:3所示。
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