[发明专利]一种聚乙二醇化降糖多肽及其制法和用途

权利要求书

1.一种聚乙二醇化降糖多肽，其特征是：所述降糖多肽的氨基酸序列为序列1(SQDID NO：1)所示，

序列1：

His-Gly-Glu-Gly-Xaa1-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Xaa5-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Xaa6-Xaa7-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-Xaa8，

其中：

Xaa1是：丝氨酸，苏氨酸，或甘氨酸；

Xaa2是：精氨酸，赖氨酸，或甘氨酸；

Xaa3是：谷氨酰胺，丝氨酸，谷氨酸，或甘氨酸；

Xaa4是：亮氨酸，异亮氨酸，缬氨酸，甲硫氨酸，或丙氨酸；

Xaa5是：精氨酸，赖氨酸，甘氨酸，或组氨酸；

Xaa6是：赖氨酸，精氨酸，甘氨酸，或组氨酸；

Xaa7是：天冬酰胺，丝氨酸，苏氨酸，天冬氨酸，或甘氨酸；

Xaa8是：半胱氨酸，或羧基酰胺化的半胱氨酸；

并且在所述降糖多肽C末端氨基酸Xaa8的侧链巯基上共价连接有聚乙二醇。

2.根据权利要求1所述的聚乙二醇化降糖多肽，其特征是：所述的C末端氨基酸Xaa8的侧链巯基上共价连接的聚乙二醇数均分子量为5000-40000。

3.一种制备权利要求1所述的聚乙二醇化降糖多肽的方法，其特征是它包括以下步骤：

步骤1.根据上述聚乙二醇降糖多肽中氨基酸序列，按照大肠杆菌密码子表，结合密码子偏爱性，设计对应的核酸序列并合成；

步骤2.以加端PCR的方法在序列的5’端添加Kpn1识别序列及Asp-Asp-Asp-Asp-Lys序列相应的DNA序列，在其3’端添加TAA终止密码子及Hind3识别序列，通过Kpn1/Hind3限制性酶切位点将该片段插入到pET32a表达载体中；

步骤3.将所得重组质粒转化入表达宿主菌BL21(DE3)，挑取阳性克隆后进行发酵培养，培养结束后离心收获菌体沉淀并超声破碎，阴离子离子交换层析纯化获得含目标降糖多肽的融合蛋白，肠激酶切割释放目标降糖多肽，阴离子交换层析结合反相液相层析纯化获得目标降糖多肽；

步骤4.以马来酰亚胺活化的甲氧基聚乙二醇对所得降糖多肽进行化学修饰；

步骤5.以阴离子交换色谱及反相液相色谱对修饰后降糖多肽进行纯化，最终获得目标聚乙二醇化降糖多肽。

4.根据权利要求3所述的聚乙二醇化降糖多肽的制备方法，其特征是：步骤4所述的马来酰亚胺活化的甲氧基聚乙二醇中聚乙二醇单元的数均分子量为5000-40000。

5.一种制备权利要求1所述的聚乙二醇化降糖多肽的方法，其特征是它包括以下步骤：

步骤1.根据上述乙二醇化降糖多肽中氨基酸序列，以Boc或Fmoc保护的氨基酸采用固相合成的方法进行多肽合成，合成的多肽以制备型反相液相进行纯化；

步骤2.以马来酰亚胺活化的甲氧基聚乙二醇对所得降糖多肽进行化学修饰；

步骤3.以阴离子交换色谱及反相液相色谱对修饰后降糖多肽进行纯化，最终获得目标聚乙二醇化降糖多肽。

6.根据权利要求5所述的聚乙二醇化降糖多肽的制备方法，其特征是：步骤4所述的马来酰亚胺活化的甲氧基聚乙二醇中聚乙二醇单元的数均分子量为5000-40000。

7.权利要求1所述的聚乙二醇化降糖多肽在制备治疗糖尿病药物中的应用。