[发明专利]力生长因子多肽及其制备方法和用途

说明书

技术领域

本发明涉及生长因子，具体属于力生长因子多肽(MGF₄₁)及其制备方法和用途。

背景技术

力生长因子(Mechano growth factor，MGF)是Goldspink等发现的一种机械牵张导致肌肉局部增长的调控因子。肌肉在力的刺激下，胰岛素样生长因子I(Insulin-like growth factor，IGF-I)基因通过选择性剪切产生两种异构体，一种与肝脏型IGF-I相类似，命名为肌肉型IGF-I(IGF-I Ea)；另一种因对力学刺激十分敏感，故命名为力生长因子(MGF)。研究发现，MGF不仅是一种生长因子，而且还是一种修复因子。MGF的功能，主要与其C端结构域有关。MGF在正常生理状态下不太常见，但当骨骼肌或心肌在机械负荷加大的状态下表达增加，参与肌肉损伤后修复的过程。MGF不仅存在于骨骼肌、心肌中，在神经系统和造骨细胞中也发现其具有修复损伤的作用。近年来研究发现MGF能够明显提高营养不良肌肉和肌萎缩侧索硬化(ALS)肌肉中干细胞的数量，并起到修复作用；MGF的导入能使营养不良的肌肉强度提高35％且具有明显的保护神经的作用。因此，MGF作为肌肉萎缩和肌肉/神经损伤修复的治疗药物具有广泛的应用前景。

为了获得MGF，国内外专家已经开展了一些研究工作，但是结果并不理想，由于MGF不稳定，在工程菌中的表达易形成包涵体，较难拿到纯品。因此寻求一种可替代MGF，并容易操作获得的产品十分必要。

发明内容

本发明的目的是提供一种力生长因子多肽及其制备方法和用途。

本发明提供的一种力生长因子多肽(MGF₄₁)是力生长因子C端41个氨基酸的多肽，其氨基酸序列为SEQ ID NO：1。

本发明提供的编码力生长因子多肽(MGF₄₁)的核苷酸序列由126个核苷酸组成，包括一个阅读框和终止密码子TAA。其核苷酸序列SEQ ID NO：2。

一种含有编码MGF₄₁的核苷酸序列的载体，它是将编码MGF₄₁的核苷酸序列克隆进表达载体后获得的重组质粒pRSETc-MGF₄₁。

一种MGF₄₁工程菌，为原核表达系统，它含有如前所述的载体。是将所述的pRSETc-MGF₄₁重组质粒转化至一种菌中，例如大肠杆菌BL21(DE3)，构建成工程菌株，例如pRSETc-MGF₄₁/BL21。

MGF₄₁的制备方法，包括如下步骤：

A)构建pRSETc-MGF₄₁表达载体；

B)按照标准法转化大肠杆菌BL21，构建大肠杆菌工程菌株pRSETc-MGF₄₁/BL21，将工程菌接种在含氨苄青霉素的LB培养基中，37℃，150r/min振荡培养至OD₆₀₀为0.5-0.7，加入IPTG使终浓度为0.5mmol/L，诱导表达5小时；

C)收集菌体，破碎细胞，离心，将上清经阳离子交换层析获得目的蛋白，冷冻干燥。

采用CCK-8法对纯化的MGF₄₁的生物学活性进行研究。实验证明，MGF₄₁具有促成肌细胞C₂C₁₂增殖的活性，该多肽可用于制备促细胞增殖的药物。

与现有技术相比本发明的优点和效果：本发明MGF₄₁多肽的制备方法简单，一步纯化即可得到目的蛋白，且该蛋白稳定性较好，并具有很好的促细胞增殖的生物学活性。

附图说明

图1MGF₄₁的Tricine-SDS-PAGE图。

图2MGF₄₁促细胞增殖活性。

具体实施方式

实施例1：

MGF₄₁表达载体的构建