[发明专利]一种用于检测牙龈卟啉菌及其亚型鉴别的多重PCR试剂盒及使用方法

权利要求书

1.一种用于检测牙龈卟啉菌及其亚型鉴别的多重PCR试剂盒，包括特异性引物和PCR试剂，其特征在于，所说的特异性引物是下述5对针对牙龈卟啉菌16s rRNA的特异性引物，还包括其他；

(1)Forward primer：5’-AGG CAG CTT GCC ATA CTG CG-3’

   Reverse primer：5’-ACT GTT AGC AAC TAC CGA TGT-3’

(2)Forward primer：5’-CGC GAC CCC GAA GGA AAA GAT T-3’

   Reverse primer：5’-CAC GGC TCA CAT AAA GAA CGC T-3’

(3)Forward primer：5’-GCT TTG CCG CTT GTG ACT TGG-3’

   Reverse frimer：5’-CCA CCG TCA CCG TTC ACC TTG-3’

(4)Forward primer：5’-CCG GAA GAT AAG GCC AAG AAA GA-3’

   Reverse primer：5’-ACG CCA ATT CGC CAA AGC T-3’

(5)Forward primer：5’-CCG GAT GGAAGT GAT GAACAGA-3’

   Reverse primer：5’-CGC GGT AAA CCT CAG CAA ATT-3’。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，其中所说的PCR试剂是Taq酶、buffer、dNTP和ddH₂O。

3.权利要求1所述的试剂盒的使用方法，是先将5种引物按相同体积混合，制得反应1液；再将其他PCR试剂混合制得反应2液，然后把反应1液与反应2液混合得到反应混合液。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，其中所说的反应2液是Taq酶、buffer、dNTP和ddH₂O按1∶20∶16∶23的体积比混合得到。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，按1∶2的体积比将反应1液与反应2液混合得到反应混合液。

6.根据权利要求3-5之一所述的方法，其特征在于，取待检测样本放入到有双蒸水的Ependorf管中，加热煮沸后加入到反应混合液中进行PCR扩增，然后进行琼脂糖凝胶电泳，再根据电泳条带的位置确定有无牙龈卟啉菌及其亚型。