[发明专利]用环介导恒温扩增技术检测柯萨奇病毒A16型的引物组及检测体系有效
| 申请号： | 201010217270.X | 申请日： | 2010-07-05 |
| 公开（公告）号： | CN101892322A | 公开（公告）日： | 2010-11-24 |
| 发明（设计）人： | 赵化冰;王毅铮;赵宏;孟斌;高宏生;张国辉;李国良;王俊虹;黄爱华;尹光雅;赵国平 | 申请（专利权）人： | 中国人民武装警察部队医学院 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 天津市北洋有限责任专利代理事务所 12201 | 代理人： | 陆艺 |
| 地址： | 300162 *** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 用环介导 恒温 扩增 技术 检测 柯萨奇 病毒 a16 引物 体系 | ||
1.用环介导恒温扩增技术检测柯萨奇病毒A16型的引物组，其特征是它由序列表中SEQID NO.1所示核苷酸序列、SEQ ID NO.2所示核苷酸序列、SEQ ID NO.3所示核苷酸序列和SEQ ID NO.4所示核苷酸序列组成。
2.用环介导恒温扩增技术检测柯萨奇病毒A16型的检测体系，其特征是该体系由下述原料组成：
10×的ThermoPol缓冲液1.25μL；
25mmol/L的Mg2+ 0.5μL-1μL；
5mol/L的Betaine 0.5μL-2μL；
10mmol/L的dNTP 1μL-2μL；
10μmol/L的序列表中SEQ ID NO.1所示核苷酸序列0.25μL；
10μmol/L的序列表中SEQ ID NO.2所示核苷酸序列0.25μL；
100μmol/L的序列表中SEQ ID NO.3所示核苷酸序列0.2μL；
100μmol/L的序列表中SEQ ID NO.4所示核苷酸序列0.2μL；
8U/μL的Bst酶0.5μL；
加超纯水至总体积为11μL。
3.用环介导恒温扩增技术检测柯萨奇病毒A16型的方法，其特征是它包括下述步骤：
(1)提取待检测样品中的病毒RNA并逆转录为cDNA；(2)取1.5μL所述cDNA加入到11μL的用环介导恒温扩增技术检测柯萨奇病毒A16型的检测体系中，10000转/分钟，离心30秒；(3)加入20μL矿物油，于63℃恒温中进行环介导恒温扩增技术扩增1-1.5小时；(4)取出反应管，加入SYBR Green Ⅰ型核酸染料，若反应液变成绿色，则说明待测样品中存在柯萨奇病毒A16型，若为桔黄色，则说明待测样品中不存在柯萨奇病毒A16型，所述用环介导恒温扩增技术检测柯萨奇病毒A16型的检测体系由下述原料组成：
10×的ThermoPol缓冲液1.25μL；
25mmol/L的Mg2+ 0.5μL-1μL；
5mol/L的Betaine 0.5μL-2μL；
10mmol/L的dNTP 1μL-2μL；
10μmol/L的序列表中SEQ ID NO.1所示核苷酸序列0.25μL；
10μmol/L的序列表中SEQ ID NO.2所示核苷酸序列0.25μL；
100μmol/L的序列表中SEQ ID NO.3所示核苷酸序列0.2μL；
100μmol/L的序列表中SEQ ID NO.4所示核苷酸序列0.2μL；
8U/μL的Bst酶0.5μL；加超纯水至总体积为11μL。
4.用环介导恒温扩增技术检测柯萨奇病毒A16型的检测体系的用途。
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