[发明专利]一种从菱壳中提取抗胃癌活性成分的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种提取菱壳中抗胃癌活性成分的方法。

背景技术

菱角(water chestnut)原产于欧洲和亚洲的温暖地区，为一年生蔓性水生草本植物，在我国已有3000多年的栽培历史。目前我国菱角的种植面积约40000公顷，年产量约24万吨。菱角出壳率在30％左右，据统计每年产出的鲜菱壳可达71000～72000吨。大量菱角壳并没有得到有效的利用，不仅污染环境，也造成极大浪费。近年来，我国学者通过研究发现菱壳中含有生物碱、黄酮类物质、多糖类物质和挥发油等功能性成分，研究表明菱壳的水提取物具有抗癌活性。采用现代技术高效提取菱角壳中的抗癌活性成分，既能解决废弃菱角壳对环境的污染，且对提高农副产品附加值、增加农民收入有非常重要的现实意义。

目前关于从菱壳中提取抗胃癌活性成分的报道大多是以黄酮类、多糖类等常规的植物性化合物作为指标物质研究，此类研究最终无非是单一活性物质的抗胃癌活性研究，例如菱壳黄酮的抗胃癌活性。研究单一活性成分的抗胃癌作用已经有很长的历史，但是在抗胃癌的活性方面并没有大的突破，且中药讲究的是配伍，通常混合物的活性最强。虽然体外实验证明上述单一活性物质均有体外抑癌活性，但是经过消化道的消化作用后活性情况却大打折扣，一般只有原有活性的30％左右。

目前菱角类植物半仿生提取方法的应用未有报道，利用体外离体胃癌细胞模型作为抗胃癌活性筛选的研究也没有报道。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种提取物活性高、生产工艺简洁的从菱壳中提取抗胃癌活性成分的方法。

为了解决上述技术问题，本发明提供一种从菱壳中提取抗胃癌活性成分的方法，依次包括以下步骤：

1)、以菱壳粉作为原料，向原料中加入pH＝2的缓冲液以及占原料总重1％～10％的胃蛋白酶，于37℃水浴静止提取0.5～6h，然后离心，去除上清液，得滤渣；

2)、在步骤1)所得滤渣中加入pH＝8的缓冲液和占原料总重1％～10％的胰蛋白酶，于37℃水浴静止提取0.5～6h，离心，所得的上清液为具有抗胃癌活性的初提取液；

3)、将步骤2)所得的上清液进行12000～14000转/分钟离心25～35min，离心后所得液体经冻干处理，得抗胃癌活性成分。

作为本发明的从菱壳中提取抗胃癌活性成分的方法的改进：步骤3)为：将所得的上清液先于-20℃预冻0.5小时，然后于-50～-60℃冻干10～15小时。

作为本发明的从菱壳中提取抗胃癌活性成分的方法的进一步改进：菱壳为南湖菱壳。

作为本发明的从菱壳中提取抗胃癌活性成分的方法的进一步改进：步骤1)中胃蛋白酶的活力为3000-3500NF U/mg，步骤2)中胰蛋白酶的活力为≥250NF U/mg。

作为本发明的从菱壳中提取抗胃癌活性成分的方法的进一步改进：步骤1)中pH＝2的缓冲液与原料的体积重量比为：10～50mL pH＝2的缓冲液/g原料；3000转/分钟离心10min。

作为本发明的从菱壳中提取抗胃癌活性成分的方法的进一步改进：步骤2)中pH＝8的缓冲液与原料的体积重量比为：10～50mL pH＝8的缓冲液/g原料；3000转/分钟离心10min。

作为本发明的从菱壳中提取抗胃癌活性成分的方法的进一步改进：步骤3)中的离心为：13000转/分钟离心30min。

在本发明的提取方法中，菱壳粉为干燥处理后菱壳经粉碎而得，菱壳粉中的含水率≤5％；以菱壳粉作为原料，是为了提高提取效率。本发明中所述的南湖菱为南湖特产无角菱。

在本发明的提取方法中，步骤1)所述的pH＝2缓冲液为pH＝2的甘氨酸-盐酸缓冲溶液，步骤2)所述的pH＝8缓冲液为pH＝8的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲溶液。步骤1)和步骤2)中均采取了37℃的仿生水浴条件。

本发明中所使用的胃蛋白酶属于消化系统胃的主要消化酶成分，所使用的胰蛋白酶属于消化系统小肠的主要消化酶成分；胃蛋白酶和胰蛋白酶均为普通市购品，例如，胃蛋白酶可购自格源天润生物技术有限公司，胰蛋白酶可购自格源天润生物技术有限公司。

为了检测本发明所得的抗胃癌活性成分的性能，先将本发明所得的抗胃癌活性成分按照0.05g原料/ml高纯水的料液比用高纯水回溶，然后0.22μm无菌滤膜(水膜)过滤，过滤后所得的滤液用于胃癌细胞处理，检测提取物对胃癌细胞的抑制活性。抑癌实验证实，本发明所得的抗胃癌活性成分对胃癌细胞存活有显著的抑制效果，具有开发成天然抗胃癌药物的潜在价值。