[发明专利]从禾叶山麦冬中分离制备禾叶山麦冬皂苷A的方法

说明书

技术领域

本发明属于轻工技术领域，涉及禾叶山麦冬活性成分的提取分离和制备，特别是从禾叶山麦冬中分离制备禾叶山麦冬皂苷A的方法。

背景技术

禾叶山麦冬的块根做山麦冬入药，属于民间地方用药；其药用功能：能清心润肺，养胃生津，除烦，止血；用于急、慢性支气管炎，肺热咳嗽，吐血，咯血，热病烦渴，口腔溃疡等。进一步的药理研究证实甾体皂苷类成分是能代表山麦冬活性的一类成分，国内外研究表明很多甾体皂苷具有防治心血管疾病、抗肿瘤，提高免疫等活性。从禾叶山麦冬中提取皂苷，至今未有相关文献报道。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种工艺简洁、成本低廉的从禾叶山麦冬中分离制备禾叶山麦冬皂苷A的方法。

为了解决上述技术问题，本发明提供一种从禾叶山麦冬中分离制备禾叶山麦冬皂苷A的方法，包括以下步骤：

1)、将禾叶山麦冬块状根粉碎后作为原料，采用乙醇回流浸提，所得浸提液浓缩后得浸膏；

2)、将浸膏用正丁醇萃取，浸膏与正丁醇的体积比为1∶1，得皂苷萃取液；将皂苷萃取液真空浓缩后，得正丁醇相萃取物；

3)、将正丁醇相萃取物采用D101型大孔树脂分离，分别用水以及质量浓度分别为25％、50％、75％和95％的乙醇溶液洗脱不同极性的组分，得到初步纯化的皂苷洗脱液；

4)、将75％乙醇溶液所得的皂苷洗脱液真空浓缩至糊状，再冷冻干燥，得皂苷粗提物；

5)、采用逆流色谱方法分离纯化皂苷粗提物，得皂苷组分；

6)、皂苷组分进行真空浓缩，直至固形物浓度达到60％以上，再采用冷冻干燥，得粉末状的禾叶山麦冬皂苷A。

作为本发明的从禾叶山麦冬中分离制备禾叶山麦冬皂苷A的方法的改进：步骤5)的逆流色谱方法为：采用逆流色谱仪为分离设备，由体积比为1～3∶4∶3∶1～3的正丁醇、水、正己烷和甲醇组成溶剂系统，溶剂系统上相作固定相，下相作流动相；将固定相注入逆流色谱仪的色谱柱，以流动相作为溶剂溶解步骤4)所得的皂苷粗提物作为逆流色谱样品溶液；开启逆流色谱仪和流动相输液泵，将样品溶液和流动相输入逆流色谱分离柱，用紫外-可见检测器检测逆流色谱流出液，根据所得的色谱图收集皂苷组分。

作为本发明的从禾叶山麦冬中分离制备禾叶山麦冬皂苷A的方法的进一步改进：步骤1)中的浸提为：乙醇与原料的液料体积比为5～10ml/1g，浸提时间为2.5～3.5小时；浸提次数为2～3次。

作为本发明的从禾叶山麦冬中分离制备禾叶山麦冬皂苷A的方法的进一步改进：步骤2)、步骤4)和步骤6)的真空浓缩均为：真空度低于0.09Mpa，温度为60～70℃。

作为本发明的从禾叶山麦冬中分离制备禾叶山麦冬皂苷A的方法的进一步改进：步骤4)和步骤6)的冷冻干燥均为：真空度低于50Pa，温度-38℃～-35℃。

作为本发明的从禾叶山麦冬中分离制备禾叶山麦冬皂苷A的方法的进一步改进：逆流色谱仪为高速逆流色谱仪(HSCCC)。

在本发明的方法中，采用逆流色谱方法分离纯化皂苷粗提物，溶剂系统由常温常压下处于液态的正丁醇、水、正己烷和甲醇溶液组成；并且取用该溶剂系统的部分下相来溶解皂苷粗提物从而制备皂苷组分。

本发明所得的禾叶山麦冬皂苷A特征和性能如下：

白色粉末，mp255～256℃，微溶于甲醇，易溶于吡啶等，Liebermann-Burchard反应阳性(墨绿色)，molish反应呈阳性(界面出现紫色环)。分子量为1002，分子式为C₄₉H₇₈O₂₁，结构式如下：

禾叶山麦冬皂苷A的质谱及核磁谱图分别如图2～图9所示，具体为：MS谱如图2所示；¹H-NMR谱如图3所示；¹³C-NMR谱如图4所示，DEPT 90图如图5所示，DEPT 135图如图6所示，¹H-¹H COSY谱如图7所示，HSQC谱如图8所示，HMBC谱如图9所示。